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产品简介
Human CD4 Nanobeads可以用于基于CD4抗原表达的人类细胞分离。CD4在所有T细胞上表达，并与T细胞受体相关。本产品由CD4单克隆抗体与纳米级磁珠偶联而成，从而实现CD4阳性T细胞的分选。
其原理是CD4分选磁珠直接与细胞结合后，将细胞与磁珠混合悬浮液加载到放置在MACS Separator的分离磁铁中的MS或LS柱，或其他合适的分选柱中。磁分离后留在磁柱中的细胞即为阳性分选的CD4表达细胞，从而进行后续的相关实验研究；也可收集分离的下清液，即为阴性分选的无CD4表达细胞。
产品信息
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货号 |
37605ES05 |
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规格 |
2 mL |
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分选能力 |
Up to 1×109 cells |
产品性质
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基质（Matrix） |
葡聚糖纳米磁珠 |
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配体（Ligand） |
Anti-CD4 antibody |
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粒径（Particle Size） |
50-100 nm |
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分选能力（Separation Capacity） |
Up to 5×108 cells/mL beads |
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储存缓冲液（Storage Buffer） |
1 X PBS (pH7.2-7.4) containing 2 mM EDTA, 0.5% BSA buffer without Ca2+ |
储存条件
2~8℃避光保存，有效期6个月。
使用说明
一、所需材料准备
1.分离缓冲液：1 X PBS (pH7.2-7.4) containing 2 mM EDTA, 0.5% BSA（牛血清白蛋白）buffer without Ca2+，2~8℃保持冷却。
【注】：不推荐使用含有Ca2+或Mg2+的PBS。
BSA可以被HSA（人血清白蛋白）、人血清或胎牛血清（FBS）替代，EDTA可以被柠檬酸钠替代。
2.分选柱和分离器：MS或LS柱，或其他合适的分选柱。MACS Separator的分离磁铁。
二、样品准备
1.确定细胞数。
2.将细胞悬浮液在300 g 转速下离心 10 分钟，完全吸取上清液。
3.按照1x107个细胞用80 μL缓冲液重悬细胞颗粒 (可以提前用30 μm细胞过滤网去除粘连的、大块装的细胞), 每1x107个细胞加入20 μL CD4分选磁珠，用于 CD4阳性细胞分离。如果希望同时标记CD4和另一种CD蛋白，建议使用 60μL 缓冲液重悬细胞颗粒，并加入20 μL CD4分选磁珠和20 μL另一种CD蛋白的抗体分选磁珠。(每1x107个细胞)
4.混合均匀，并在冰箱中孵育15分钟(2~8℃)。
5.每1x107细胞加入1-2 mL的缓冲液清洗细胞，然后300 g离心10分钟，完全吸出上清液。
6.在500 μL的缓冲液中重新悬浮最多1x108个细胞，对于 1x107或更少的细胞重悬于50 μL的缓冲液中，对于更高的细胞数量，相应地增加缓冲液体积。
三、 磁性细胞分离
1.使用MS或LS柱进行磁分离。
2.将分选柱置于合适的MACS Separator的分离磁铁中。
3.用适量缓冲液冲洗色谱柱，MS: 500 μL，LS: 3 mL。
4.将细胞悬浮液滴在分选柱上，收集含有未标记细胞的流出液。
5.用适量缓冲液冲洗分选柱，收集通过的未标记细胞，并与步骤4）的流出液混合。MS: 3X500 μL，LS:3x3 mL。
【注】：一旦分选柱储液器空，就立即加入等量的缓冲液进行清洗步骤。
6.从分离磁铁中取出分选柱，将其置于合适的收集管中。将适量的缓冲液移到分选柱上。将柱塞推入分选柱并冲出磁性标记的细胞。MS:1 mL，LS:5 mL。
7.然后可以对细胞进行计数，并分析以评估其纯度或用于下游应用。不需要移除分选磁珠。为确保细胞活性，应将所需的细胞立即重新悬浮在细胞培养基中。
注意事项
1. 我司不建议在磁性分选结束前使用荧光标记。因为磁选和荧光抗体适配性需要验证，使用不适配荧光标记可能会影响磁性分离的效果。磁选后的正、负细胞样品可以正常使用荧光标记做流式细胞分析。
2. 本产品仅作科研用途！
3. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
Ver.CN20240912
