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基质胶应用操作指南

 

基质胶是从富含胞外基质蛋白EHS小鼠肿瘤中提取出的可溶性基底膜制备物,其主要成分由层粘连蛋白,Ⅳ型胶原,硫酸乙酰肝素蛋白聚糖(HSPG)和巢蛋白等组成,还包含生长因子如TGF-beta、EGF、IGF、FGF、组织纤溶酶原激活物和EHS肿瘤自身含有的其他生长因子。在1980年代中期由丹麦的 J. Engelbreth-Holm和Richard Swarm二者分别发现并具体描述基质胶【1】,其主要生产过程是用盐水提取/洗涤肿瘤匀浆后可溶性蛋白质,再用溶剂萃取产物中不溶性复合物,在低温下使用缓冲液进行透析后获得无色到淡黄色溶液。

 

 

图.翌圣基质胶产品特点

 

基质胶为组织和细胞提供支撑、抗拉强度和支架支撑,也可以作为细胞粘附和运动的三维亚结构以及生长因子、趋化因子和细胞因子的储存库,同时可用作为细胞形态发生和分化的信号等。

 

图.基质胶的应用方向

 

以下结果采用的是翌圣生物开发生产的Ceturegel®基质胶和高活性细胞因子等其他配套试剂试验获取。

 

 
侵袭实验及3D培养

 

 
血管生成
 
 

图.HUVEC细胞血管生成结果图及血管免疫荧光染色结果

 

 
体内成瘤
 
 

图.以HepG2细胞皮下接种至BALB/c-nu雌性小鼠,饲养1月观察结果

 

 
类器官培养
 
 

 

 
相关产品-基质胶
 
 

类型

货号

产品名称

应用方向

即用型

3-6 mg/ml

40182

Ceturegel®  Matrix Ready-to-use,LDEV-Free基质胶

适应于细胞培养、贴壁、侵袭和迁移实验以及细胞分化等研究

 

基本浓度

8-12 mg/ml

40183

Ceturegel® Matrix LDEV-Free基质胶

适应于2D和3D培养、侵袭和迁移实验,也可以用于体内成瘤实验

40184

Ceturegel® Matrix Phenol Red-Free,LDEV-Free 基质胶

主要应用于需要颜色检测如荧光检测实验等

 

高浓度

≥18mg/ml

40187

Ceturegel® Matrix High Concentration,LDEV-Free 基质胶

 

主要应用于如血管生成、凝胶栓塞和体内成瘤实验(对于血管生成建议基质胶终浓度要≥10mg/ml)

40189

Ceturegel® Matrix High Concentration,GFR,LDEV-Free 基质胶

40188

Ceturegel® Matrix High Concentration,Phenol Red-Free,LDEV-Free 基质胶

 

 

低生长因子

40185

Ceturegel® Matrix GFR,LDEV-Free 基质胶

 

主要是排除生长因子对实验的干扰。应用于与生长因子、信号通路等相关研究。无酚红的也用来做类器官培养

40186

Ceturegel® Matrix GFR,Phenol Red-Free,LDEV-Free 基质胶

干细胞用

40190

Ceturegel® Matrix hESC-Qualified,LDEV-Free 基质胶

主要用于如hESC,iPSC等干细胞培养

类器官用

40191

Ceturegel® Matrix for Organoid culture,Phenol Red-Free,LDEV-Free 基质胶

类器官培养专用基质胶

 

鼠尾胶原

40125

Collagen, Type I , from rat tail 鼠尾胶原蛋白I(大鼠源)

侵袭和迁移。培养或分化研究

40136

Cebrary® Collagen, Type I , from mouse tail 鼠尾胶原蛋白I型(小鼠源)

侵袭和迁移。培养或分化研究

 

 
相关产品-细胞因子
 
 

Wnt3a类器官培养案例结果

蛋白名称

种属

货号

规格

Wnt3a

Human

92276ES60/76

100/500 ug

R-Spondin 1

 

Human

92278ES60/76

100/500 ug

Mouse

92277ES60/76

100/500 ug

Noggin

 

Human

92528ES60/76

100/500 ug

Mouse

92262ES60/76

100/500 ug

EGF

 

Human

92701ES60/76

100/500 ug

Mouse

92703ES60/76

100/500 ug

FGF-2

 

Human

91330ES60/76

100/500 ug

Mouse

91315ES60/76

100/500 ug

FGF-4

Human

91303ES60/76

100/500 ug

FGF-7

 

Human

91304ES60/76

100/500 ug

Mouse

91316ES60/76

100/500 ug

FGF-9

 

Human

91305ES60/76

100/500 ug

Mouse

91318ES60/76

100/500 ug

FGF-10

 

Human

91306ES60/76

100/500 ug

Mouse

91319ES60/76

100/500 ug

FGF-19

Human

91311ES60/76

100/500 ug

Activin A

Human/Mouse/Rat

91702ES60/76

100/500 ug

BMP-2

Human/Mouse/Rat

92051ES60/76

100/500 ug

BMP-4

 

Human

92053ES60/76

100/500 ug

Mouse

92056ES60/76

100/500 ug

BMP-7

Human

92054ES60/76

100/500 ug

DKK-1

Human

92275ES60/76

100/500 ug

VEGF165

Human

91502ES60/76

100/500 ug

HGF

Human

92055ES60/76

100/500 ug

GDNF

 

Human

92102ES60/76

100/500 ug

Mouse

92103ES60/76

100/500 ug

IGF-1

Human

92201ES60/76

100/500 ug

Shh

 

Human

92566ES60/76

100/500 ug

Mouse

92589ES60/76

100/500 ug

BDNF

Human

92129ES60/76

100/500 ug

NRG1

Human

92711ES60/76

100/500 ug

SHH

 

Human

92566ES60/76

100/500 ug

Mouse

92589ES60/76

100/500 ug

 

 
相关产品-类器官培养基
 
 

应用类别

产品名称

货号

规格

小鼠小肠

Cebrary® Intestinal Organoid Growth Medium (Mouse)

小鼠肠类器官生长培养基

41426ES60/76

l00/500mL

结肠癌(人)

Cebrary® Intestinal Cancer Organoid Growth Medium (Human)

肠癌类器官生长培养基

41427ES60/76

l00/500mL

胃癌(人)

Cebrary® Gastric Cancer Organoid Growth Medium (Human)

胃癌类器官生长培养基

41428ES60/76

l00/500mL

肝癌(人)

Cebrary® Liver Cancer Organoid Growth Medium (Human)

肝癌类器官生长培养基

41429ES60/76

l00/500mL

乳腺癌(人)

Cebrary® Breast Cancer Organoid Growth Medium (Human)

乳腺癌类器官生长培养基

41430ES60/76

l00/500mL

肺癌(人)

Cebrary® Lung Cancer Organoid Growth Medium (Human)

肺癌类器官生长培养基

41431ES60/76

l00/500mL

食管癌(人)

Cebrary® Esophageal  Cancer Organoid Growth Medium (Human)

食管癌类器官生长培养基

41432ES60/76

l00/500mL

卵巢癌(人)

Cebrary® Ovarian cancer Organoid Growth Medium (Human)卵巢癌类器官生长培养基

41433ES60/76

l00/500mL

胰腺癌(人)

Cebrary® Pancreatic cancer Organoid Growth Medium (Human)胰腺癌类器官生长培养基

41434ES60/76

l00/500mL

 

 
小分子抑制剂和激活剂
 
 

产品名称

货号

规格

产品名称

货号

规格

CHIR-99021

53003ES10

10 mg

Wortmannin

52405ES10

10 mg

SB-431542

53004ES10

10 mg

Trichostatin A

51406ES10

10 mg

LDN193189 (DM-3189)

53012ES10

10 mg

5-Azacytidine

53160ES10

10 mg

LDN-193189 HCl

52606ES10

10 mg

A 83-01

53002ES10

10 mg

DAPT (GSI-IX,LY-374973)

52104ES10

10 mg

Nicotinamid

51402ES10

10 mg

Y-27632

53006ES10

10 mg

AICAR(Acadesine)

52401ES10

10 mg

Y-27632 dihydrochloride

52604ES10

10 mg

Cyclopamine

52913ES10

10 mg

LY-411575 (LY411575)

53014ES10

10 mg

LY294002

52403ES10

10 mg

Valproic acid

52982ES10

10 mg

Prostaglandin(PG) E2

60810ES10

10 mg

Repsox

53016ES10

10 mg

Sodium Butyrate

51501ES10

10 mg

Purmorphamine

53023ES10

10 mg

IDE1 

53234ES10

10 mg

Retinoic acid 

53001ES10

10 mg

IDE2

53235ES10

10 mg

Forskolin

51001ES10

10 mg

Dorsomorphin  dihydrochloride

53010ES10

10 mg

IWR-1

52915ES10

10 mg

SB-202190

53005ES10

10 mg

SB 203580

52002ES10

10 mg

 

 

 

 

 
其他类器官培养试剂
 
 

产品类别

名称

货号

规格

 

组织细胞消化

 

 

 

 

Collagenase I 胶原酶I型

40507ES60

100mg

Collagenase II 胶原酶II型

40508ES60

100mg

Collagenase III 胶原酶III型

40509ES60

100mg

Collagenase IV胶原酶IV型

40510ES60

100mg

Collagenase V胶原酶V型

40511ES60

100mg

 

 

培养添加物

 

 

 

L-丙氨酰-L-谷氨酰胺,200mM

60701ES60/76

100/500 mL

B-27无血清添加剂,去除维生素A,50X

60704ES10

10 mL

N-2 supplement,serum free N-2无血清添加剂

60706ES08

5 mL

L-Glutamine L-谷氨酰胺

60314ES60

100g

 

 

支原体系列

 

 

 

支原体预防试剂(2000×)

40608ES03

1mL

支原体去除试剂(1000×)

40607ES03

1mL

GMyc-PCR Mycoplasma Test Kit GMyc-PCR 支原体检测试剂盒

40601ES10/20

10/20 assays

MycAway™ Plus-Color One-Step Mycoplasma Detection Kit

一步法快速支原体检测试剂盒

40612ES25/60

25/60T

 
引用
 
 

[1] Kleinman H K ,  Martin G R . Ceturegel: basement membrane matrix with biological activity.[C]// Seminars in Cancer Biology. 2005.

 

附录
基质胶使用规范
 
 
Q
 
A
如何融化Ceturegel®基质胶,融化需要多长时间?

将Ceturegel®基质胶埋整瓶没在碎冰盒中,再将冰盒置于4℃冰箱中,过夜融化,确保碎冰足量。融化后转动瓶子查看Ceturegel®基质胶是否全部融化,确认无冰晶或胶块残留。我们建议过夜融化,高蛋白浓度的Ceturegel®基质胶可能需要更多的时间。请勿将Ceturegel®基质胶瓶直接放在4℃冰箱中融化,也请勿将冰盒及Ceturegel®基质胶放置在冰箱门上或冰箱靠门的位置。以下图片可供参考:

 

Q
 
A
融化后Ceturegel®基质胶状态是如何?

标准型Ceturegel®基质胶融化后应为澄清的液体,无酚红的为澄清且透明;蛋白浓度越高,融化后液体越粘稠。具体请参考下图Ceturegel®基质胶融化后的照片,左边两瓶是高浓度型,右边两瓶是标准型:

Q
 
A
基质胶如何分装冻存使用?

可将冻融后的Ceturegel®基质胶分装在多个小管,所有分装均需用预冷的冻存管,迅速冷冻并保存,避免多次冻融。所有涉及到使用的物品在使用前需预冷,使用预冷的移液管、吸头及小管等操作基质胶。

Q
 
A
Ceturegel®基质胶融化时发现有凝胶,融化不了是怎么回事?

Ceturegel®基质胶对温度非常敏感,超过10℃即开始成胶,超过22℃成胶速度会更快。如果到货情况正常,出现此种现象应该是融化操作不规范或者融化期间环境温度升高导致部分凝胶。请一定严格按照融化操作规范执行,确保融化时保持低温环境。

Q
 
A
如何稀释Ceturegel®基质胶?

一般可用预冷的无血清培养基或pH7.4的PBS稀释。由于批次之间的浓度差异,推荐按照特定的工作终浓度稀释,而不要以比例或稀释倍数稀释。

Q
 
A
使用Ceturegel®时需要注意哪些方面?

所有接触Ceturegel®的试剂耗材产品都需要预冷,操作过程应全程在冰上操作,确保低温环境。Ceturegel®对温度十分敏感,一旦超过10℃,即开始凝胶。

 

 
细胞因子使用规范
 
 
  • 离心:收到的管子内为冻干粉,开盖前要快速离心10000-12000rpm,30s,以便使可能脱落粘附在管盖或管壁上的蛋白聚集于管底。

  • 溶解:用说明书上指定溶液进行溶解,溶解浓度控制在 0.1-1.0 mg/mL。注意:不要用涡旋振荡仪剧烈涡旋,剧烈震荡会造成蛋白失活 可以用枪头轻轻吹打几次助溶,或者室温静置一段时间。

     

  • 稀释:稀释可用PBS或者基础培养基溶液,其中需含有0.1%BSA或者10%FBS或者5%海藻糖备用(确保无菌),使用以上三种稀释液的任意一种稀释重悬的蛋白溶液,稀释浓度根据您的使用浓度确定,不要低于10ug/ml。即可分装成小管,冻存在-20—80℃。

     

  • 使用:使用时取用一支冻存的细胞因子,加入到您的培养基中至使用浓度。细胞因子应避免反复冻融。

 

客户使用引用文献-基质胶

【1】Wang Z, Wang Q, Chen C, Zhao X, Wang H, Xu L, Fu Y, Huang G, Li M, Xu J, Zhang Q, Wang B, Xu G, Wang L, Zou X, Wang S. NNMT enriches for AQP5+ cancer stem cells to drive malignant progression in early gastric cardia adenocarcinoma. Gut. 2023 Mar 28:gutjnl-2022-328408. doi: 10.1136/gutjnl-2022-328408. Epub ahead of print. PMID: 36977555.   IF31.793
【2】Luo K, Gao Y, Yin S, Yao Y, Yu H, Wang G, Li J. Co-delivery of paclitaxel and STAT3 siRNA by a multifunctional nanocomplex for targeted treatment of metastatic breast cancer. Acta Biomater. 2021 Oct 15;134:649-663. doi: 10.1016/j.actbio.2021.07.029. Epub 2021 Jul 18. PMID: 34289420.  IF19.92
【3】Zhao Y, Lu T, Song Y, Wen Y, Deng Z, Fan J, Zhao M, Zhao R, Luo Y, Xie J, Hu B, Sun H, Wang Y, He S, Gong Y, Cheng J, Liu X, Yu L, Li J, Li C, Shi Y, Huang Q. Cancer Cells Enter an Adaptive Persistence to Survive Radiotherapy and Repopulate Tumor. Adv Sci (Weinh). 2023 Mar;10(8):e2204177. doi: 10.1002/advs.202204177. Epub 2023 Jan 19. PMID: 36658726; PMCID: PMC10015890.  IF9.0

 

400-6111-883