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产品简介
p24抗原是HIV-1病毒一种主要的核心结构蛋白，且P24抗原在机体内出现比病毒抗体更早，因此能够在更早的时期检测判断是否感染艾滋病。同时在生物医学中常用的慢病毒载体，用于向细胞传递目的基因，测定p24抗原也是测量慢病毒转导效率的方法。
翌圣Human HIV-1 p24 ELISA(酶联免疫吸附测定)试剂盒是一种体外酶联免疫吸附测定试剂盒，用于定量测定血清、血浆和细胞培养上清中的HIV-1 p24。特异性抗HIV-1 p24抗体预包被在高亲和力的酶标板上。酶标板孔中加入标准品、待测样本，经过孵育，样本中存在的HIV-1 p24与固相抗体结合。洗涤去除未结合的物质后，加入检测抗体孵育结合，经洗涤，再加入酶结合物(Streptavidin-HRP)孵育结合。洗涤后，加入显色底物 TMB，避光显色。颜色反应的深浅与样本中HIV-1 p24的浓度成正比。加入终止液终止反应，在450 nm 波长(参考波长570 - 630 nm)测定吸光度值。
产品信息
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货号 |
99301ES48 / 99301ES96 |
|
规格 |
48 T / 96 T |
|
检测范围 |
15.63-1000 pg/mL |
|
检测方法 |
双抗夹心法 |
|
检测物种 |
4.5小时 |
|
检测时长 |
2.7 pg/mL |
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灵敏度 |
84 - 125% |
|
稀释线性 |
81 - 122% |
|
回收率 |
4.6% |
|
板内差 |
6.0% |
|
板间差 |
99301ES48 / 99301ES96 |
实验数据
- 标曲数据
数据拟合绘制标准曲线，生成的标曲用于实验数据分析。
标准曲线图
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浓度（pg/mL） |
显色值 |
平均值 |
校准值 |
|
|
1000 |
2.284 |
2.293 |
2.288 |
2.288 |
|
500 |
1.329 |
1.368 |
1.349 |
1.350 |
|
250 |
0.784 |
0.748 |
0.766 |
0.765 |
|
125 |
0.433 |
0.438 |
0.436 |
0.433 |
|
62.5 |
0.240 |
0.263 |
0.252 |
0.256 |
|
31.25 |
0.152 |
0.172 |
0.162 |
0.164 |
|
15.63 |
0.118 |
0.124 |
0.121 |
0.118 |
|
0 |
0.056 |
0.078 |
0.067 |
/ |
- 灵敏度检测
HIV-1 p24的最低检测限为2.7 pg/mL，通过使用重复检测20次零孔OD值的均值与标准差计算得出。
- 精密度检测
酶标板内精密度
3个已知浓度的样本酶标板内重复测定8次，评估酶标板内的精密度。
酶标板间精密度
3个已知浓度的样本酶标板间重复检测20次，评估酶标板间的精密度。
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项目 |
板内精密度 |
板间精密度 |
||||
|
样本 |
1 |
2 |
3 |
1 |
2 |
3 |
|
8 |
8 |
8 |
20 |
20 |
20 |
|
|
平均值 |
554.5 |
163.0 |
40.0 |
569.2 |
170.1 |
41.3 |
|
标准差 |
11.5 |
5.5 |
3.3 |
21.3 |
9.5 |
3.6 |
|
变异系数（%） |
2.1 |
3.4 |
8.2 |
3.7 |
5.6 |
8.8 |
- 回收率检测
通过不同水平的HIV-1 p24添加于样本中来测定回收率，其回收率如下:
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样本类型 |
平均回收率(%) |
范围（%） |
|
血清 |
98.4 |
90.0-104.8 |
|
血浆 |
101.1 |
88.6-117.7 |
|
细胞培养上清 |
100.5 |
81.3-122.3 |
- 稀释线性检测
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血清稀释比例 |
平均期望值(%) |
范围（%） |
|
1:02 |
102.7 |
95.4-112.6 |
|
1:04 |
100.7 |
91.9-109.8 |
|
1:08 |
98.9 |
93.2-107.9 |
|
1:16 |
102.3 |
89.2-112.5 |
|
血浆稀释比例 |
平均期望值(%) |
范围（%） |
|
1:02 |
104.6 |
96.2-113.1 |
|
1:04 |
110.8 |
104.4-115.9 |
|
1:08 |
116.2 |
113.5-120.8 |
|
1:16 |
116.9 |
109.0-124.9 |
|
细胞培养上清稀释比例 |
平均期望值(%) |
范围（%） |
|
1:02 |
98.6 |
93.4-103.6 |
|
1:04 |
96.0 |
92.8-100.7 |
|
1:08 |
98.2 |
89.1-104.8 |
|
1:16 |
94.5 |
83.6-95.9 |
- 滴度计算
p24抗原的测定是测量慢病毒转导效率的标准方法，通常以一个慢病毒载体（LP）含2000个p24抗原蛋白计算。每个LP约等于2000×24×103 /(6×1023）g即8×10-5 pg的p24抗原，反推可得每ng的p24抗原=1.25×107 个LP，按每100-1000LP具一感染力的病毒载体（TU）可计算出每ng的p24约1.25×104 ~ 1.25×105 TU
注意以上仅为估算值，实际样品中的游离p24会使测试值偏高。通常超过106TU/ml的病毒含量才能确保慢病毒载体的浓缩纯化收获足够浓度。
- 测定特异性
本试剂盒识别天然和重组HIV-1 p24，没有观察到明显的交叉反应和干扰影响。
检测简图
疑问解答
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问题 |
造成原因 |
解决方法 |
|
标曲不好 |
移液量不准确 |
检查移液器，按时校准，仔细操作，充分混匀时盖紧管口并尽量避免泡沫。 |
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稀释方法不恰当 |
||
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显色值偏低 |
孵育时间太短 |
给予足够的孵育时间，样本和溶解的标准品隔夜后更换。 |
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移液量不足或稀释不当 |
校准移液器和规范操作 |
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CV偏高 |
酶标板清洗不当 |
使用正确的洗涤工序；如果使用洗板机，检查所有的端口是否堵塞。 |
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受污染的洗液 |
准备新鲜洗液 |
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灵敏度较低 |
试剂盒储存不当 |
按照产品组分表进行保存。 |
Ver. CN20240730
