产品说明书
FAQ
COA
已发表文献
离子交换树脂主要包括强酸性阳离子交换树脂、弱酸性阳离子交换树脂、强碱性阴离子交换树脂和弱碱性阴离子交换树脂4种，广泛用于生物制药和生物工程下游蛋白质、核酸及多肽的分离纯化。
本品SP强阴离子交换树脂以高度交联的6%琼脂糖为介质，小颗粒设计，高分辨率，多应用样品的精细纯化。本品带电基团-SO3–。
翌圣为您提供蛋白纯化实验整体解决方案，相关产品选购请参考：蛋白纯化系列产品-选购指南
产品性质
|
基质（Matrix） |
高度交联的6%琼脂糖微球 |
|
粒径（Bead size） |
25-45 µm |
|
离子交换类型（Type） |
强阳离子 |
|
载量（Capacity） |
0.15-0.20mmol H+/mL 介质 |
|
流速（Flow Rate） |
≥150 cm/h |
|
pH范围（pH Range） |
4-13（长期）/ 3-14（短期） |
|
储存缓冲液（Buffer） |
20%乙醇，0.2M NaAc |
运输和保存方法
冰袋运输。2-8℃保存，有效期5年。
使用方法
1 缓冲液的准备
所用水和Buffer在使用前最好用0.22 µm或0.45 µm滤膜过滤。下表为常用的阳离子交换缓冲液。
表1：阳离子交换缓冲液
|
pH 范围 |
缓冲盐 |
浓度（mM） |
平衡离子 |
pKa(25℃) |
|
1.4-2.4 |
Maleic acid |
20 |
Na+ |
1.92 |
|
2.6-3.6 |
Methyl malonic acid |
20 |
Na+或 Li+ |
3.07 |
|
2.6-3.6 |
Citric acid |
20 |
Na+ |
3.13 |
|
3.3-4.3 |
Lactic acid |
50 |
Na+ |
3.86 |
|
3.3-4.3 |
Formic acid |
50 |
Na+或 Li+ |
3.75 |
|
3.7-4.7 |
Succinic acid |
50 |
Na+ |
4.21 |
|
4.3-5.3 |
Acetic acid |
50 |
Na+或 Li+ |
4.75 |
|
5.1-6.1 |
Succinic acid |
50 |
Na+ |
5.64 |
|
5.2-6.2 |
Methyl malonic acid |
50 |
Na+或 Li+ |
5.76 |
|
5.6-6.6 |
MES |
50 |
Na+或 Li+ |
6.27 |
|
6.7-7.7 |
Phosphate |
50 |
Na+ |
7.20 |
|
7.0-8.0 |
HEPES |
50 |
Na+或 Li+ |
7.56 |
|
7.8-8.8 |
BICINE |
50 |
Cl- |
8.33 |
2 样品准备
样品在使用前最好用0.22 µm或0.45 µm滤膜过滤，减少杂质，提高蛋白纯化效率和防止堵塞柱子。
3 样品纯化
1）将介质装入合适的层析柱，层析用5倍柱体积的结合Buffer进行平衡，使填料处于与目的蛋白相同的缓冲体系下，起到保护蛋白的作用。
2）将样品加到平衡好的SP Agarose HP中（保证目的蛋白与填料充分接触，提高目的蛋白的回收率），收集流出液。
3）用10-15倍柱体积的洗杂Buffer进行清洗，去除非特异性吸附的杂蛋白，收集洗杂液。
4）使用5-10倍柱体积的洗脱Buffer，收集洗脱液，即目的蛋白组分。
5）依次使用3倍柱体积的结合Buffer和5倍柱体积的去离子水平衡填料，最后再用5倍柱体积的20%的乙醇平衡，然后保存在等体积的20%的乙醇中，置于4度保存，防止填料被细菌污染。
4 填料清洗
离子交换树脂每次使用后可以用1M NaCl 甚至更高离子强度溶液或高pH溶液清洗，然后用至少5倍柱体积的Buffer 进行平衡至离子强度或pH值稳定。
CIP（Cleaning In Place）清洗
离子交换树脂可以重复使用而无需再生，但随着非特异性结合的蛋白的增多和蛋白的聚集，往往造成流速和结合载量都下降，这时可按照下面方法对树脂进行清洗。
1）去除一些沉淀或变性物质
用2倍柱体积的1M NaOH 溶液进行清洗，然后立即用5倍柱体积的PBS, pH7.4清洗。
2）去除一些疏水性吸附造成的非特异性吸附物质
用3-4倍柱体积的70%乙醇或3-4倍柱体积的1% Triton™ X-100 清洗，然后立即用5倍柱体积的PBS, pH7.4清洗。
3）去除一些离子键结合物质
用3-4倍柱体积的2M NaCl清洗，然后立即用5倍柱体积的PBS, pH 7.4清洗。
注意事项
1）请勿冷冻保存本产品。
2）填料使用前一定要充分颠倒若干次，使琼脂糖珠混合均匀。
3）所有操作过程中，样本需要在4℃或冰上操作。
4）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
5）本产品仅作科研用途！
附表 问题及解决方案
|
问题 |
可能原因 |
推荐解决方案 |
|
柱子反压过高 |
填料被堵塞 |
按照【填料清洗】部分对树脂进行清洗。 |
|
样品中含有微小的固体颗粒，建议使用前用0.22 µm或0.45 µm滤膜过滤。 |
||
|
洗脱样品较杂 |
树脂重复多次使用 |
按照【填料清洗】部分对树脂进行清洗或更换新树脂。 |
|
平衡不充分 |
增加平衡液体积，确保树脂充分平衡/洗杂。 |
HB220629
