离子交换主要包括强阳离子交换、弱阳离子交换、强阴离子交换和弱阴离子交换4种，广泛用于生物制药和生物工程下游蛋白质、核酸及多肽的分离纯化。

CM弱阳离子交换层析填料FF以高度交联的6%琼脂糖为基架，可耐受较高的流速及更高的化学稳定性，适合实验室及工业大规模纯化。本品带电基团-O-CH₂COO^–。

本品CM弱阳离子交换预装柱是CM弱阳离子交换层析填料FF的中压预装柱，规格为1 mL，该预装柱具有标准接口，可以适配商品化的各类中压色谱系统，如ÄKTA等，方便客户操作。

 

产品性质

基质	高度交联的6%琼脂糖微球
粒径	45-165 µm
离子交换类型	弱阳离子
载量	～0.09-0.13 mmol H+/mL 基质
耐压	0.3 MPa
建议流速	300-600 cm/h
pH范围	4-13（长期）/ 2-14（短期）
储存缓冲液	20%乙醇
柱子尺寸	0.7×2.5 cm（1 mL）

 

运输和保存方法

冰袋运输。2-8℃保存，有效期2年。

 

使用方法

1 缓冲液的准备

应选择缓冲基团不与介质作用的缓冲盐，平衡缓冲液宜采用低盐和低 pH（通常低于目的物等电点 1 个 pH 单位）缓冲液以有利于目的物的结合，同时需要考虑目的物在缓冲液中的稳定性。洗脱缓冲液通常为在平衡缓冲液中加入高浓度盐（如 1M NaCl）的缓冲液或高 pH 洗脱。所用水和Buffer在使用前最好用0.22 µm或0.45 µm滤膜过滤。

表1：阳离子交换缓冲液

pH 范围	缓冲盐	浓度（mM）	平衡离子	pKa(25℃)
1.4-2.4	Maleic acid	20	Na+	1.92
2.6-3.6	Methyl malonic acid	20	Na+或 Li+	3.07
2.6-3.6	Citric acid	20	Na+	3.13
3.3-4.3	Lactic acid	50	Na+	3.86
3.3-4.3	Formic acid	50	Na+或 Li+	3.75
3.7-4.7	Succinic acid	50	Na+	4.21
4.3-5.3	Acetic acid	50	Na+或 Li+	4.75
5.1-6.1	Succinic acid	50	Na+	5.64
5.2-6.2	Methyl malonic acid	50	Na+或 Li+	5.76
5.6-6.6	MES	50	Na+或 Li+	6.27
6.7-7.7	PhoCMhate	50	Na+	7.20
7.0-8.0	HEPES	50	Na+或 Li+	7.56
7.8-8.8	BICINE	50	Cl-	8.33

 

2 样品准备

样品在使用前最好用0.22 µm或0.45 µm滤膜过滤，减少杂质，提高蛋白纯化效率和防止堵塞柱子。

3 样品纯化

1）将泵管道中注满去离子水。去掉上塞子，将层析柱连接至色谱系统中。再折断下口，将预装柱接到色谱系统中，并旋紧。

2）用3-5倍柱体积的去离子水冲洗出存储缓冲液。

3）使用至少5倍柱床体积的结合Buffer平衡色谱柱。

4）利用泵或注射器上样。

【注】样品的粘度增加使得即使上样体积很少也会导致层析柱很大的反压。上样量不要超过柱子的结合能力。大量的样品体积也可能造成很大的反压，使得进样器更难使用。

5）用洗杂Buffer冲洗柱子，直到紫外吸收达到一个稳定的基线（一般至少10-15个柱体积）。

6）用洗脱Buffer采用一步法或线性梯度洗脱。一步洗脱中，通常5倍柱体积洗脱液就足够了。可以用一个小的梯度，例如20倍柱体积或更多，来分离不同结合强度的蛋白质。

5 填料清洗

离子交换填料每次使用后可以用1M NaCl甚至更高离子强度溶液或高pH溶液清洗，然后用至少5倍柱体积的Buffer进行平衡至离子强度或pH值稳定。

CIP（Cleaning In Place）清洗

离子交换填料可以重复使用而无需再生，但随着非特异性结合的蛋白的增多和蛋白的聚集，往往造成流速和结合载量都下降，这时可按照下面方法对填料进行清洗。

1）去除一些沉淀或变性物质

用2倍柱体积的1 M NaOH溶液进行清洗，然后立即用5倍柱体积的PBS, pH7.4清洗。

2）去除一些疏水性吸附造成的非特异性吸附物质

用3-4倍柱体积的70%乙醇或3-4倍柱体积的1% Triton™ X-100清洗，然后立即用5倍柱体积的PBS, pH7.4清洗。

3）去除一些离子键结合物质

用3-4倍柱体积的2 M NaCl清洗，然后立即用5倍柱体积的PBS, pH 7.4清洗。

 

注意事项

1）请勿冷冻保存本产品。

2）为了得到良好的分离效果，避免缓冲液与层析柱有太大温差变化。

3）层析柱可以放在层析冷柜中使用，但是需要适当降低流速。

4）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

5）本产品仅作科研用途！

 

附表 问题及解决方案

问题	可能原因	推荐解决方案
柱子反压过高	填料被堵塞	按照【填料清洗】部分对填料进行清洗。
		样品中含有微小的固体颗粒，建议使用前用0.22 µm或0.45   µm滤膜过滤。
洗脱样品较杂	填料重复多次使用	按照【填料清洗】部分对填料进行清洗或更换新填料。
	平衡不充分	增加平衡液体积，确保填料充分平衡/洗杂。

 

HB220708