小鼠T细胞激活试剂盒（抗体包被法）专为小鼠脾脏、淋巴结、外周血原代静息态T细胞设计，可高效激活CD4⁺、CD8⁺、Treg等各类T细胞亚群，适配常规细胞培养板固相激活体系。

激活原理

T细胞体外完全活化依赖双重信号协同调控，本试剂盒采用固相抗体包被模式，通过培养板表面固定抗体实现持续性、均匀性刺激，规避游离抗体刺激弱、活化不均一的问题，保障T细胞稳定活化、正常增殖与分化，核心原理如下：

1.第一信号（抗原识别信号）：高纯度抗小鼠CD3单克隆抗体经固相包被固定于培养板底部，可持续、稳定结合T细胞表面TCR-CD3复合体，高效启动T细胞抗原识别核心信号通路，唤醒静息态T细胞，完成初始活化激活，信号刺激持久且均匀。

2. 第二信号（共刺激信号）：搭配共包被的抗小鼠CD28特异性抗体，提供关键共刺激信号，有效解除T细胞无能状态，持续激活下游NF-κB、MAPK等核心信号通路，促进T细胞活化、存活，为后续增殖与亚型分化提供必要条件。

3. 增殖辅助信号：配套高活性重组小鼠IL-2细胞因子，为活化后的T细胞提供特异性增殖信号，有效促进T细胞规模化扩增，维持细胞生理活性与分化稳定性，避免活化后细胞凋亡、增殖停滞，适配长期培养与分化实验。

产品组分

组分信息

Mouse IL-2复溶方法

开盖之前，先离心，以将内容物带到底部。使用无菌蒸馏水或PBS复溶，重新配制至0.1-1.0 mg/mL的浓度，可根据后续实验更进一步稀释；长期储存，建议稀释缓冲液中加入载体蛋白(0.1% BSA)；分装为一次实验用量，-80℃冻存，避免反复冻融。

小鼠T细胞激活实验方案

完全培养基配方供参考：

抗小鼠CD3单克隆抗体固定方法

1. 将NA/LE Rat anti-mouse CD3 Recombinant mAb稀释至PBS中，最终浓度为10µg/mL。

2. 将稀释后的NA/LE Rat anti-mouse CD3 Recombinant mAb按每孔1mL加入24孔板中固定。

2. 在37°C、5% CO₂条件下孵育2小时，或在4°C下孵育过夜。

4. 从24孔板中移除NA/LE Rat anti-mouse CD3 Recombinant mAb。

5. 准备小鼠脾脏的单细胞悬液。对于T细胞激活，细胞应重悬于完全培养基中，浓度为(1-3)×10⁶细胞/mL。对于24孔板，推荐浓度为1×10⁶细胞/mL。

6. 在V型管中准备完全补充的T细胞培养基，向步骤6中的细胞悬液中加入以下细胞因子和抗体：

- 2µg/mL NA/LE Syrian Hamster anti-mouse CD28 mAb

- 10ng/mL IL-2 Protein, Mouse

7. 将所需量的细胞转移到合适的细胞培养板中，最终密度为(1-1.5)×10⁶细胞/mL/cm²。

8. 在37°C、5% CO₂条件下孵育2天。

9. 培养2天后，检查细胞的健康状况并记录图像。

10. 以400×g离心细胞悬液5分钟，弃去上清液。用PBS洗涤细胞沉淀。

11. 以400×g离心细胞悬液5分钟，弃去上清液。将细胞重悬于0.5mL 1%牛血清白蛋白（BSA）中，计数细胞。检测细胞活性，要求活性>95%。

12. 用10µg小鼠IgG抗体阻断1×10⁶细胞。在冰浴中孵育30分钟。

13. 根据说明书加入FITC大鼠抗小鼠CD25抗体（S-R441）（S0B5215），在4°C下孵育30分钟。

14. 以400×g离心细胞悬液5分钟，用含1% BSA的PBS洗涤细胞沉淀两次。

15. 将细胞沉淀重悬于200µl PBS中，用于流式细胞术分析（需>10000个细胞）。

       流式分析

-25 ~ -15℃保存，收到货之后有效期1年。避免反复冻融，打开小瓶前先离心。建议等分分装为一次实验使用量，避免反复冻融。