BMDC（Bone Marrow-Derived Dendritic Cells)，中文名称是骨髓来源的树突状细胞。小鼠DC主要来源于骨髓，通过在培养基中添加特定的细胞因子组合，可以诱导骨髓造血前体细胞分化为不同亚型的DC。树突状细胞（DC)是功能最强大的专职抗原呈递细胞，是连接天然免疫与适应性免疫的桥梁。在体外培养和操作DC是免疫学研究和免疫治疗开发的核心技术。

本细胞因子套装包含重组小鼠GM-CSF、重组小鼠IL-4和重组小鼠TNF-α。GM-CSF，是核心因子，能驱动骨髓祖细胞向髓系DC谱系增殖和分化。IL-4，主要作用是抑制巨噬细胞的过度生长，并促进细胞获得更典型的DC表型（高表达MHC II、CD11c）。TNF-α，是强大的成熟刺激信号，诱导BMDC的完全成熟，一般在分化后期加入。

产品组分

产品包含

 以上试剂使用浓度仅供参考，最佳浓度请参考相关文献，根据具体实验条件和实验目的优化。

   复溶方法

小鼠BMDC诱导分化方案

1. 小鼠骨髓细胞的获得

1.1 小鼠(6-10周龄)颈椎脱臼法处死，手术取出所有股骨和胫骨，并剪刀和镊子将骨周围的肌肉组织尽量去除干净；

1.2 将骨移至超净台内，并用盛有70%酒精的无菌培养皿浸泡2-5 min，以消毒灭菌，然后用无菌的PBS洗2次；
1.3 将骨移入另一个盛有PBS 的新培养皿中，用剪刀剪去骨两端，再用注射器抽取PBS，针头分别从骨两端插入骨髓腔，反复冲洗出骨髓至培养皿中，直至骨完全变白；
1.4 收集骨髓悬液，用200目尼龙网滤；
1.5 过滤液1200 rpm 离心5 min，弃上清；
1.6 加入2 mL氯化铵红细胞裂解液(1x)，重悬细胞，室温孵育3-5 min，最长10 min；
1.7 加入10 mL PBS 中和裂解液的作用，然后1200 rpm 离心5 min，弃上清;
1.8 PBS 洗1 次，然后用含10% FBS的RPMI1640培养液重悬细胞，至此已获得小鼠骨髓细胞。

氯化铵红细胞裂解液的配制：

1）先配制10x的贮存液，配法如下：称取82.9 g NH₄Cl，10.0gKHCO₃和0.37g Na₂EDTA，溶于1 L的蒸馏水中，0.22 μm滤膜过滤除菌，4℃储存6个月；

2）临用前，将10x贮存液用无菌蒸馏水1 : 9稀释成1x工作液即可。

【注】：因氯化铵红细胞裂解液对骨髓细胞有一定的伤害作用，所以要尽量缩短溶血时间。

2. BMDC 的诱导分化

2.1. 用培养基将细胞密度调整为1×10^6/mL

2.2. 铺至24 孔培养板内，每孔1mL 细胞，同时加入重组小鼠GM-CSF (20 ng/mL)和IL-4 (20 ng/mL)，37℃，5% CO₂培养箱培养，此为培养的第0天；

2.3. 每2天轻轻摇晃培养板，然后1/2体积更换新鲜培养液，并补足细胞因子。

2.4. D6收集悬浮细胞和贴壁细胞，1200 rpm离心5分钟，弃上清。

2.5. 用含10% FBS的RPMI 1640完全培养液重悬细胞并计数，然后调整细胞浓度至1×10⁶/mL，并加入重组小鼠GM-CSF (20 ng/mL)和IL-4 (20 ng/mL)，此为不完全成熟的BMDC。

2.6. 细胞铺板至100 mm培养皿(每皿最多10 mL)或6孔培养板(2 mL/孔)。
2.7. 37℃，5% CO₂培养箱继续培养1-2天。

3. BMDC的完全成熟

3.1. 在D7-8天，用将以上获得的BMDC以1200 rpm离心5 min，弃上清；

3.2. RPMI完全培养液重悬沉淀，计数后调整细胞浓度为1×10⁶/mL；同时加入TNF-α (20 ng/mL)，GM-CSF (20 ng/mL)和IL-4 (20 ng/mL)；

3.3. 37℃，5% CO2 培养箱培养2天；

3.4 D9-10天收集悬浮细胞和贴壁生长的细胞，即为成熟树突状细胞。

1. 省心便捷：无需单独采购多种细胞因子、反复摸索配比，开箱即用。

2. 黄金配比：3种细胞因子最佳浓度配比，协同增效，高效扩增、分化细胞。

3. HiActi^®细胞因子：严格活性验证，蛋白纯度>98%，内毒素<0.1EU/μg。

4. 高性价比：全套因子 + Protocol + 验证数据，比单买更省。

5. 高纯度高成熟：CD11c⁺纯度≥90%，CD86⁺/MHC-II⁺成熟表型≥80%

6. 标准Protocol: 含细胞接种、因子添加、成熟诱导全流程。

案例1.

第9天形态图片

                           200X                                                                                  400X

第9天流式检测结果

       流式细胞检测高表达CD11c+MHCⅡ，阳性率88%，符合成熟BMDC的表达谱。

案例2.

培养7天后，细胞计数，共收获1.27×10⁷ BMDC细胞，后加入TNF-α (20 ng/mL)，GM-CSF (20 ng/mL)和IL-4 (20 ng/mL)诱导培养24小时，获取到成熟的BMDC细胞。光镜下可看到BMDC呈现集落式生长，高倍镜下可观察到抗原递呈细胞突触。

       流式细胞检测CD11c阳性的细胞比例在90%以上，且高表达CD86和MHCⅡ，符合成熟BMDC的表达谱。