PCR Enhancer是一种由多种成分组成的混合添加剂,在PCR反应中,PCR Enhancer能够有效降低高GC模板和具有复杂二级结构模板的解链温度,极大地减少DNA二级结构对PCR的影响,增加PCR反应的灵敏度和特异性,且兼容几乎所有DNA聚合酶的扩增体系。当优化PCR程序无法有效扩增目的片段时,加入PCR Enhancer往往能得到意想不到的结果。本产品可能会降低PCR的保真度。因此,在进行高保真PCR时慎用。
质量控制
核酸外切酶残留检测:10 μL本品和1 μg λDNA –Hind III,37℃下孵育4 h,DNA的电泳谱带无变化。
核酸内切酶残留检测:10 μL本品和1 μg λDNA,37℃温育4 h,DNA的电泳谱带无变化。
使用方法
本产品为5×浓度,推荐终浓度为1×。如50 μL反应体系中,加入PCR Enhancer 10 μL。
运输与保存方法
冰袋运输。-20℃保存,有效期2年。
注意事项
1)为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
2)本产品仅作科研用途!
应用实例
以人基因组为模板,使用Taq DNA Polymerase扩增GC含量为72%的片段。
PCR反应体系(冰上配制)
组分 |
体积 |
终浓度 |
ddH2O |
to 50 μL |
- |
10×PCR Buffer (with 15 mM MgCl2) |
5 μL |
1× |
dNTP Mix (10 mM each) |
1 μL |
0.2 μM |
PCR Enhancer |
10 μL |
1× |
DNA模板 |
100 ng |
2 ng/μL |
Primer正向 (10 μM) |
2 μL |
0.4 μM |
Primer反向 (10 μM) |
2 μL |
0.4 μM |
Taq DNA Polymerase(5 U/μL) |
0.4 μL |
2 U/50 μL |
PCR扩增程序
循环步骤 |
温度 |
时间 |
循环数 |
预变性 |
95℃ |
5 min |
1 |
变性 |
95℃ |
30 sec |
30 |
退火 |
55℃ |
30 sec |
|
延伸 |
72℃ |
60 sec/kb |
|
终延伸 |
72℃ |
7 min |
1 |
琼脂糖凝胶电泳检测:
用Taq DNA Polymerase扩增大小为690 bp, GC含量为72%的片段。只有加入5×PCR Enhancer才能扩增出如箭头所指的目的片段。
M: DNA Marker III。
相关产品
产品名称 |
货号 |
规格 |
10101ES80/90 |
1000/5×1000 U |
|
10102ES03/08 |
1/5×1 mL |
|
10103ES03/08 |
1/5×1 mL |
|
10106ES03/08 |
1/5×1 mL |
|
10108ES03/08 |
1/5×1 mL |
|
10149ES03/08 |
1/5×1 mL |
HB210705