RNA提取常见问题及解决方案（高频避坑）
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2026-03-17
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常见问题 |
可能原因 |
解决方案 |
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RNA降解（电泳呈弥散带，无清晰条带）
轻微降解：28S条带变淡，出现降解带；b严重降解：只剩18S条带或一片模糊 |
1. 样品室温放置过久，RNase被激活；2. 器材/试剂含RNase；3. 反复冻融样品；4. 操作剧烈，RNA断裂。 |
1. 样品取样后立即速冻或加入裂解液；2. 更换无RNase器材/试剂，DEPC水配制试剂；3. 样品分装保存，避免反复冻融；4. 温和操作，避免剧烈震荡、吹打。 |
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RNA浓度低（Nanodrop检测浓度<50ng/μL） |
1. 样品量过少；2. 裂解不充分；3. 沉淀时RNA丢失；4. 洗涤时RNA被吸走受到损失。 |
1. 增加样品量，调整样品与裂解液的比例；2. 延长裂解时间、加强研磨/吹打；3. 加入辅助沉淀剂，-20℃过夜；4. 弃上清时小心操作，避免触碰沉淀。 |
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RNA纯度低（Nanodrop检测A260/A280<1.8或>2.0） |
1. <1.8：蛋白质污染；2. >2.0：RNA降解或盐离子污染；3. 多糖/多酚污染（植物样品常见）。 |
1. 蛋白质污染：增加氯仿-异戊醇抽提次数，重新沉淀；2. 盐离子污染：增加75%乙醇洗涤次数；3. 多糖/多酚污染：提取时加入PVPP（聚乙烯聚吡咯烷酮），吸附多糖/多酚。 |
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RNA难以溶解（仅在trizol法中会遇到） |
1. 沉淀晾干过度；2. RNA沉淀量过多；3. 溶解时未充分静置。 |
1. 避免沉淀过度晾干，超净台中风干1-2min即可；2. 减少样品量，重新提取；3. 加入洗脱液后，室温静置10min，温和吹打，必要时37℃孵育5min辅助溶解 |
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DNA污染（PCR检测有DNA条带）
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1. 吸取水相时触碰到中层沉淀，造成DNA污染；2. 裂解不充分，DNA未完全分离；3. 样品中DNA含量过高。 |
1. 重新抽提，小心吸取水相，避免触碰中层；2. 加强裂解，延长室温静置时间；3. RNA溶解后用DNase I处理，去除残留DNA。 |
RNA提取相关产品选品指南
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系列 |
兼容样本 |
主要应用 |
产品特点 |
产品名称 |
产品货号 |
产品形式 |
适配提取仪 |
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磁珠法 |
适用多种动物组织如肝脏、肾脏、脾脏、心脏、皮肤、水产类等样本 |
转录组分析、基因表达分析 |
RNA完整性好 |
磁珠法组织/细胞总RNA提取 |
瓶装 |
通用 |
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板式 |
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板式 |
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植物组织 |
植物转录组分析、基因表达分析 |
适用于多糖多酚样本提取 |
磁珠法植物RNA提取 |
瓶装 |
通用 |
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柱法 |
各种动植物、细菌组织和细胞样品 |
转录组分析、基因表达分析 |
结合了TRIzol法+离心柱，方便快捷 |
总RNA提取(带离心柱) |
瓶装 |
— |
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细胞、组织 |
科胶转录组分析、Northern、点杂交、mRNA纯化等分子实验 |
15min加速提取，RNA完整度好，一次性去除gDNA |
细胞/组织总RNA提取 |
瓶装 |
— |
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转录组分析、基因表达分析 |
5min加速提取，RNA完整度好，一次性去除gDNA |
培养细胞RNA提取 |
瓶装 |
— |
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新鲜血液 |
血液基因表达分析 |
TRIzol法，提取得率高 |
血液RNA提取 |
瓶装 |
— |
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植物组织、真菌组织 |
植物转录组分析、基因表达分析 |
RNA完整性好 |
植物RNA提取 |
瓶装 |
— |
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多糖多样本提取效率高 |
多糖多酚植物RNA提取 |
瓶装 |
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革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌 |
细菌表达谱分析 |
搭配溶菌酶，提取效率高 |
细菌RNA提取 |
瓶装 |
— |
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动物组织、细胞 |
小RNA分析 |
TRIzol法，兼容miRNA和total RNA提取 |
细胞/组织miRNA提取 |
瓶装 |
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血浆、血清等液体样本 |
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血清/血浆miRNA提取 |
瓶装 |
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