pGMLV-CMV-RFP-GFP-hLC3-Puro Lentivirus
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11941ES70
100μl×4管 (1E8 TU/mL)
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细胞自噬(autophagy)是真核生物中进化保守的对细胞内物质进行周转的重要过程。该过程中一些损坏的蛋白或细胞器被双层膜结构的自噬小泡包裹后,送入溶酶体(动物)或液泡(酵母和植物)中进行降解并得以循环利用。

检测自噬形成时,使用电镜耗时长,不利于监测(Monitoring)自噬形成,而hLC3在自噬形成过程中会发生聚集的现象,翌圣生物利用hLC3这种现象,构建了带GFP和RFP标记的用于细胞自噬检测的慢病毒和腺病毒产品。无自噬时,RFP-GFP-hLC3融合蛋白弥散在胞浆中,在荧光显微镜下显示为黄色斑点;自噬形成时,由于自噬小体进入第二阶段后,与溶酶体进行融合,形成自噬溶酶体。自噬溶酶体由于溶酶体内部的酸性环境,可以导致PH下降,GFP淬灭,因此,GFP的减弱可指示自噬溶酶体形成的顺利程度,GFP越少,则从自噬小体到自噬溶酶体阶段流通得越顺畅。反之,自噬小体和溶酶体融合被抑制,自噬溶酶体进程受阻。RFP是一直稳定表达的,因此通过不同颜色斑点的计数可以清晰看出自噬流的强弱。

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