产品描述

 

细胞自噬(autophagy)是真核生物中进化保守的对细胞内物质进行周转的重要过程。该过程中一些损坏的蛋白或细胞器被双层膜结构的自噬小泡包裹后，送入溶酶体(动物）或液泡（酵母和植物）中进行降解并得以循环利用。

检测自噬形成时，使用电镜耗时长，不利于监测（Monitoring）自噬形成，而hLC3在自噬形成过程中会发生聚集的现象，翌圣生物利用hLC3这种现象，构建了带GFP和RFP标记的用于细胞自噬检测的慢病毒和腺病毒产品。无自噬时，RFP-GFP-hLC3融合蛋白弥散在胞浆中，在荧光显微镜下显示为黄色斑点；自噬形成时，由于自噬小体进入第二阶段后，与溶酶体进行融合，形成自噬溶酶体。自噬溶酶体由于溶酶体内部的酸性环境，可以导致PH下降，GFP淬灭，因此，GFP的减弱可指示自噬溶酶体形成的顺利程度，GFP越少，则从自噬小体到自噬溶酶体阶段流通得越顺畅。反之，自噬小体和溶酶体融合被抑制，自噬溶酶体进程受阻。RFP是一直稳定表达的，因此通过不同颜色斑点的计数可以清晰看出自噬流的强弱。

 

质粒图谱

 

 

保存方法

 

-80℃保存，有效期6个月，如保存时间过长，使用前请重新检测病毒滴度。

 

注意事项

 

1）病毒操作时最好使用生物安全柜，如使用普通超净工作台操作病毒，请不要打开风机。

2）病毒操作时请穿实验服，带口罩和乳胶手套。

3）操作病毒时必须特别小心，不要产生气雾或飞溅。如操作时超净台有病毒污染，立即用10%次氯酸钠溶液搽拭干净。接触过病毒的枪头、离心管和培养板等需用10%次氯酸钠溶液浸泡1 h以上后弃去。

4）用显微镜观察细胞感染情况时应遵从以下步骤：拧紧培养瓶或盖紧培养板。用70%乙醇清理培养瓶外壁后到显微镜处观察拍照。离开显微镜试验台前，用70%乙醇清理实验台。

5）病毒操作完成后，用肥皂清洗双手。
6）本产品仅作研究用途！

 

 

Ver.CN20240104