phi29 DNA polymerase来源于Bacillus subtilis噬菌体，经基因工程改造后具有卓越的链置换和持续合成能力，可合成长达70 kb的DNA片段。此外其3’→5’核酸外切酶校读活性较强，推荐体系中引物3’末端修饰以防止降解，常用于质粒的体外合成和全基因组合成。

 

产品组分

组分编号	组分名称	产品编号/规格
		14409ES03	14409ES08	14409ES25
14409	phi29 DNA Polymerase (100 U/μL）	1 mL	5 mL	25 mL

 

产品应用

1）全基因组扩增（WGA）；

2）滚环扩增 (RCA)；

3）多重置换扩增（MDA）。

 

单位定义

1 U指30℃条件下反应10 min，能使0.5 pmol的dNTP掺入酸不溶性沉淀所需的酶量。

 

运输与保存方法

干冰运输。-20℃保存，有效期2年。

 

质量控制

纯度检测：纯度大于95%。

核酸外切酶残留检测：10 U本品和0.5 μg λDNA-Hind Ⅲ，37℃下孵育4 h，DNA电泳谱带无变化。

切口酶残留检测：100 U本品和0.5 μg IL23R质粒，37℃下孵育4 h，DNA电泳谱带无变化。

RNase残留检测：10 U本品和0.5 μg 293T-RNA，37℃下孵育4 h，DNA电泳谱带无变化。

 

热失活

65℃，10 min。

 

注意事项

1. Buffer在融解时，如果出现少量沉淀属正常现象，请颠倒混匀后使用；

2. 本产品仅做科研用途；

3. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

 

使用方法（以基因组DNA扩增为例）

1. 反应体系配制：

组分	用量
10×phi29 Reaction Buffer（Cat#15442ES）	2 μL
随机引物	总投入量20-75 μM
dNTPs	总投入量2 mM
基因组DNA	5-50 ng
ddH2O	to 19
phi29 DNA Polymerase (10 U/μL）	10-20 U

2. 反应条件：30℃孵育3 h，65℃，10 min失活phi29 DNA polymerase。

HB221129