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COA
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离子交换主要包括强阳离子交换、弱阳离子交换、强阴离子交换和弱阴离子交换4种，广泛用于生物制药和生物工程下游蛋白质、核酸及多肽的分离纯化。
本品Magnify Q HP是一种强阴离子交换层析介质，以表面接枝了葡聚糖的高刚性琼脂糖为基架，具有高流速状态下仍具有高的动态结合能力的优点，可以很好的提高工业下游工艺的生产效率。且本品平均粒径在40 μm左右，具有更高的比表面积，更高的载量和分辨率。本品离子交换基团-N+(CH3)3。
产品性质
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基质 |
高刚性琼脂糖微球 |
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平均粒径 |
40 µm |
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离子交换类型 |
强阴离子 |
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载量 |
0.20-0.24 mmol Cl-/mL 介质 |
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推荐流速 |
≤300 cm/h |
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pH范围 |
2-12（长期）/ 2-14（短期） |
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储存缓冲液 |
20%乙醇 |
运输和保存方法
冰袋运输。4-30℃保存，有效期5年。
使用方法
1 缓冲液的准备
所用水和Buffer在使用前最好用0.22 µm或0.45 µm滤膜过滤，下表为常用的阴离子交换缓冲液。
表1：阴离子交换缓冲液
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pH 范围 |
缓冲盐 |
浓度（mM） |
平衡离子 |
pKa(25℃) |
|
4.3-5.3 |
N-Methylpiperazine |
20 |
Cl- |
4.75 |
|
4.8-5.8 |
Piperazine |
20 |
Cl-或HCOO- |
5.33 |
|
5.5-6.5 |
L-Histidine |
20 |
Cl- |
6.04 |
|
6.0-7.0 |
bis-Tris |
20 |
Cl- |
6.48 |
|
6.2-7.2 |
bis-Tris propane |
20 |
Cl- |
6.65 |
|
7.3-8.3 |
Triethanolamine |
20 |
Cl-或CH3COO- |
7.76 |
|
7.6-8.6 |
Tris |
20 |
Cl- |
8.07 |
|
8.0-9.0 |
N-Methyl-diethanolamine |
20 |
SO42- |
8.52 |
|
8.0-9.0 |
N-Methyl-diethanolamine |
50 |
Cl-或CH3COO- |
8.52 |
|
8.4-9.4 |
Diethanolamine |
50 |
Cl- |
8.88 |
|
8.4-9.4 |
Propane 1,3-Diamino |
20 |
Cl- |
8.88 |
|
8.6-9.6 |
bis-Tris propane |
20 |
Cl- |
9.10 |
|
9.0-10.0 |
Ethanolamine |
20 |
Cl- |
9.50 |
|
9.2-10.2 |
Piperazine |
20 |
Cl- |
9.73 |
|
10.0-11.0 |
Propane 1,3-Diamino |
20 |
Cl- |
10.55 |
|
10.6-11.6 |
Piperidine |
20 |
Cl- |
11.12 |
2 样品准备
样品在使用前最好用0.22 µm或0.45 µm滤膜过滤，减少杂质，提高蛋白纯化效率和防止堵塞柱子。
3 样品纯化
1）将介质装入合适的层析柱，层析用5倍柱体积的结合Buffer进行平衡，使填料处于与目的蛋白相同的缓冲体系下，起到保护蛋白的作用。
2）将样品加到平衡好的Magnify Q HP中（保证目的蛋白与填料充分接触，提高目的蛋白的回收率），收集流出液。
3）用10-15倍柱体积的洗杂Buffer进行清洗，去除非特异性吸附的杂蛋白，收集洗杂液。
4）使用5-10倍柱体积的洗脱Buffer，收集洗脱液，即目的蛋白组分。
5）依次使用3倍柱体积的结合Buffer和5倍柱体积的去离子水平衡填料，最后再用5倍柱体积的20%的乙醇平衡，然后保存在等体积的20%的乙醇中，置于4度保存，防止填料被细菌污染。
4 填料清洗
离子交换树脂每次使用后可以用1M NaCl 甚至更高离子强度溶液或高pH溶液清洗，然后用至少5倍柱体积的Buffer 进行平衡至离子强度或pH值稳定。
CIP（Cleaning In Place）清洗
离子交换树脂可以重复使用而无需再生，但随着非特异性结合的蛋白的增多和蛋白的聚集，往往造成流速和结合载量都下降，这时可按照下面方法对树脂进行清洗。
1）去除一些沉淀或变性物质
用2倍柱体积的1M NaOH 溶液进行清洗，然后立即用5倍柱体积的PBS, pH7.4清洗。
2）去除一些疏水性吸附造成的非特异性吸附物质
用3-4倍柱体积的70%乙醇或3-4倍柱体积的1% Triton™ X-100 清洗，然后立即用5倍柱体积的PBS, pH7.4清洗。
3）去除一些离子键结合物质
用3-4倍柱体积的2M NaCl清洗，然后立即用5倍柱体积的PBS, pH 7.4清洗。
注意事项
1）请勿冷冻保存本产品。
2）填料使用前一定要充分颠倒若干次，使琼脂糖珠混合均匀。
3）所有操作过程中，样本需要在4℃或冰上操作。
4）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
5）本产品仅作科研用途！
附表 问题及解决方案
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问题 |
可能原因 |
推荐解决方案 |
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柱子反压过高 |
填料被堵塞 |
按照【填料清洗】部分对树脂进行清洗。 |
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样品中含有微小的固体颗粒，建议使用前用0.22 µm或0.45 µm滤膜过滤。 |
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洗脱样品较杂 |
树脂重复多次使用 |
按照【填料清洗】部分对树脂进行清洗或更换新树脂。 |
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平衡不充分 |
增加平衡液体积，确保树脂充分平衡/洗杂。 |
HB220629
