Hieff Unicon® Universal Superfast qPCR Mix(One Tube)是一款采用公司新一代抗体法热启动 Taq 酶的荧光定量qPCR 预混液,本产品通用性好,且支持快速程序和全预混形式。在 DNA 多重扩增应用场景中具备以下特点:(1)试剂通用性好,验证各种细菌、真菌、病毒等的引探进行扩增都具有优秀的扩增性能;(2)支持引物探针提前预混,全预混试剂37℃加速 7 天后扩增性能保持不变;(3)支持快速程序,检测时间≤20min;(4)采用 dUTP/UDG 防污染体系,dUTP代替 dTTP,有效防止气溶胶污染,保证检测结果的准确性。
l 支持快速程序——支持快速程序,20min即可出结果
l 超强全预混稳定性——预混引探37℃放置7天,反复冻融20次性能稳定
l 背景残留低——大肠、铜绿及人源基因组DNA残留48孔无检出
l 试剂通用性好——适配多类型多重引探(已验证超40种不同类型靶标),均能稳定扩增
l 灵敏度高特异性好——灵敏度达200 copies/mL,48孔阴性不起峰
l dUTP/UDG防污染体系——引入了dUTP/UDG防污染系统,可有效防止气溶胶污染
l 多平台多体系适用—— Bio-Rad CFX96、ABI Q5、7500、SLAN、天隆等仪器均适配
1、快速扩增,性能优越
仪器 | SLAN | 体系 | 25 μL总体系,其中模板5uL |
模板 | 细菌质粒模板(B管、P管) | 模板浓度 | Ct30-35灵敏度测试时模板稀释到掉孔浓度附近 |
扩增程序 | 96S/48S常规:95°C 5 min;40 cycles (95°C 15sec;60°C 30 sec)--50min48S快速:95°C 15 sec;40 cycles (95°C 2sec;60°C 8 sec)--20min |
表1. 16924不同程序灵敏度测评
图1. 16924和市面上同类产品Supplier A常规程序和快速程序测评
结论:使用16924和市面上同类产品(Supplier A)检测两组4重质粒模板(B管和P管),在较高浓度(Ct30-35)时,Supplier A检测P管模板时出现快速程序较常规程序两个通道Ct值延后1以上,16924在常规程序和快速程序上Ct值无显著差异,快速程序上部分靶标Ct提前明显(如上图)。在灵敏度测评时,16924快速程序和常规程序的检测Ct值、检出率均无显著差异(如上表)。
2、全预混稳定性强
仪器 | ABI 7500、SLAN 96S | 体系 | 20 μL总体系,其中模板5uL |
模板 | 客户提供:质粒(组1-4重、组2-3重);客户提供:核酸-真实样本提取的非洲猪瘟病毒核酸(组3-单重) | 模板浓度 | 未知 |
对照 | -20℃保存的试剂,现用现配 | ||
实验组 | 将16924与两组引探混合,在37℃放置7天 | ||
扩增程序 | 95°C 90 sec;45 cycles (95°C 5sec;55°C 30 sec) |
图2. 16924不同靶标全预混稳定性测试
结论:将16924和客户提供的三组引物探针混成一管,验证其全预混性能,结果表明,对于质粒模板及非洲猪瘟真实样本提取的核酸,全预混体系在37℃加速7天后,检测性能不受影响;且对于非洲猪瘟真实样本提取的核酸模板,稀释到检出限附近(组3两个扩增曲线图为模板2倍稀释后的测试结果),热加速后的全预混体系峰形、Ct值、检出率不受影响。
3、兼容多种模板稀释液,体系耐受性强
仪器 | SLAN 96S | 体系 | 25 μL总体系,其中模板5uL |
模板 | 细菌质粒模板 | 模板浓度 | Ct 32-38 |
扩增程序 | 95°C 5 min;45 cycles (95°C 15sec;60°C 30 sec) |
图3. 16924检测2组(C管和D管)使用不同稀释液稀释的4重质粒模板的Ct值展示
图4. 16924和市面上同类产品(Supplier A)同时检测2组(C管和D管)使用不同稀释液的4重质粒模板,部分有差异扩增曲线图展示
结论:16924兼容多种稀释液稀释的模板,且相较市面同类产品(Supplier A),其对生理盐水的耐受性更好,对于部分条件有限的应用场景,其检测结果更有保障。
-25~-15℃保存,有效期1年。