产品简介

Hieff Unicon® Universal TaqMan multiplex qPCR master mix (UDG plus)是2×Mix预混合试剂，能够实现在单个反应孔中进行多达四重的荧光定量PCR反应。本产品含有基因改造的抗体法热启动Taq酶，极大地提高了扩增灵敏度和特异性。同时，本产品对多重反应缓冲体系进行了深度优化，能够提高反应的扩增效率，促进低浓度模板的有效扩增。本产品可用于基因分型和基因多重定量分析。本产品含有UDG酶，可有效防止气溶胶污染的风险。

 

产品信息

货号	11212ES03/ 11212ES08 / 11212ES10/ 11212ES12 / 11212ES13/ 11212ES60/ 11212ES62
规格	1 mL /5×1 mL /10 mL /12.5 mL /1×12.5 mL /20×5 mL /125 mL

 

组分信息

组分编号	组分名称	11212ES03	11212ES08	11212ES10	11212ES12	11212ES13	11212ES60	11212ES62
11212	2×TaqMan qPCR Mix	1 mL	5×1 mL	10 mL	12.5 mL	1×12.5 mL	20×5 mL	125 mL

 

储存条件

-25~-15℃保存，有效期18个月。

 

使用说明

1. 反应体系******

组分	体积（μL）	终浓度
2×TaqMan qPCR Mix	12.5	1×
Primer Mix (10 μM)	x	0.1-0.5 μM*
Probe Mix (10 μM)	x	50-250 nM**
Rox reference dye***	0.5	1×
模板****	1-10	-
ddH2O	up to 25*****	-

*引物浓度：Primer Mix中包含多对引物，通常每条引物终浓度为0.2 μM，也可以根据情况在0.1-0.5 μM间进行调整。

**探针浓度：Probe Mix中包含多条不同荧光信号的探针，每条探针的浓度可根据具体情况在50-250 nM间调整。

***Rox reference dye：使用在Applied Biosystems 等Real Time PCR 扩增仪上，用以校正孔与孔之间产生的荧光信号误差；本产品不含Rox reference dye。如需，推荐使用货号10200ES产品。

****模板稀释：qPCR灵敏度极高，建议将模板进行稀释使用。若模板为cDNA原液，则模板体积不超过总体积的1/10。

*****反应体系：推荐使用25 μL、30 μL或50 μL，以保证目的基因扩增的有效性和重复性。

******体系配制：请于超净工作台内配制，并使用无核酸酶残留的枪头、反应管；推荐使用带滤芯的枪头。避免交叉污染和气溶胶污染。使用前务必充分混匀，避免剧烈震荡产生过多气泡。

2. 参考扩增程序

步骤	温度	时间	循环数
污染消化	25℃	10 min	1
预变性	95℃	5 min	1
变性	95℃	15 sec	45
退火/延伸*	60℃	30 sec**

*退火/延伸：温度和时间可根据实验要求适当调整。

3. 适用机型

Applied Biosystems: 5700, 7000, 7300, 7700, 7900HT Fast, StepOne™, StepOne Plus™, 7500, 7500 Fast, ViiA™7, QuantStudio™ 3 and 5, QuantStudio™ 6,7,12k Flex;

Bio-Rad: CFX96, CFX384, iCycler iQ, iQ5, MyiQ, MiniOpticon, Opticon, Opticon 2, Chromo4;

Eppendorf: Mastercycler ep realplex, realplex 2 s;

Qiagen: Corbett Rotor-Gene Q, Rotor-Gene 3000, Rotor-Gene 6000;

Roche Applied Science: LightCycler 480, LightCycler 2.0; Lightcycler 96;

Stratagene: MX3000P™, MX3005P™, MX4000P™;

Thermo Scientific: PikoReal Cycler; Cepheid: SmartCycler; Illumina: Eco qPCR;SLAN:SLAN-96S,SLAN-96P.  

 

注意事项

1. 关于操作

1）请于使用前确保产品完全解冻并彻底混匀，短暂离心收集至管底后，置于冰上备用。

2）为避免样品间交叉污染和气溶胶污染，推荐在超净台中进行反应体系的配制。

3）使用过程中避免产品的反复冻融。

4）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

2. 实验方法

1）引物设计

a. 引物必须具有特异性。

b. 引物的Tm值必须在58-60°C，而且各组引物的Tm差异应控制在1-2°C。

c. 引物的长度一般控制在15-30 bp之间。

2）探针设计

a. TaqMan探针的Tm值要比对应的引物高约10°C（68-70°C）。

b. TaqMan探针和引物间不能形成二聚体。

 

Ver.CN20240628