疏水层析的原理
疏水层析是根据物质的疏水性质进行分离的技术。蛋白疏水性取决于表面的氨基酸残基带的疏水基团多少和强弱。
除了通过蛋白质的结构来预测蛋白的疏水性以外，我们还可根据蛋白开始盐析沉淀的盐浓度为基础来评价蛋白的相对疏水性。
图1是用四种标准蛋白质在琼脂糖苯基高分辨率介质上的层析图谱应用举例。与几乎所有的色谱图一样，左侧的垂直轴显示的是UV吸收值，通过盐浓度的变化可以实现四种蛋白的完全分离，如果考虑它们的三级结构，我们会发现疏水性弱的蛋白质会最后被洗脱下来。
图1.图片来源于网络
疏水层析的影响因素
产品简介
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类型 |
Agarose FF |
Agarose 4 FF |
Agarose HP |
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基架 |
6%的高度交联的琼脂糖 |
4%的高度交联的琼脂糖 |
6%的高度交联的琼脂糖 |
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配基 |
Phenyl |
Butyl |
Phenyl或Butyl |
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粒径 |
45-165 µm |
45-165 µm |
25-45 µm |
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用途 |
捕获、中度纯化 |
大孔设计主要针对大分子纯化 |
中度、精细纯化，高分辨率 |
产品应用
纯化步骤
测试结果
填料：5mL翌圣Butyl Agarose 4FF&其它品牌对应产品样品：发酵液上清进行SP强阳离子交换柱纯化后样品加入1.5M硫酸铵，pH3.5
样品加载：20mL
起始缓冲液A：20mM醋酸钠+1.5M硫酸铵 PH3.5
洗脱缓冲液B：20mM醋酸钠 pH3.5
流速：3mL/min
图2.翌圣Butyl Agarose 4FF纯化峰图
优势：峰较高且分辨率较高。
图3.其它品牌纯化峰图
常见问题
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问题 |
可能原因 |
推荐解决方案 |
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蛋白聚集 |
盐浓度太高 |
降低盐浓度 |
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介质的疏水性太弱 |
选用疏水性强的层析介质 |
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洗脱收率低 |
介质的疏水性太强 |
选择疏水性弱的层析介质 |
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选择的盐不适合 |
选择摩尔表面张力低的盐 |
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结合载量低 |
盐浓度偏低 |
增加盐浓度，选择强结合的盐 |
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层析介质的疏水性弱 |
选择强疏水性的介质或降低上样过程的流速 |
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洗脱峰展宽 |
层析介质疏水性太强 |
选择弱结合的盐或层析介质，或者降低洗脱流速 |
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重复性不佳 |
忽略了温度的影响 |
检查实验室、清洁室、溶液的温度以及层析柱是否需要存放在冷室中 |
订购信息
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产品名称 |
产品编号 |
规格 |
价格（元） |
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20478ES25/60/76 |
25mL/100mL/500mL |
600/1500/7000 |
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Butyl 4FF Chromatography Column, 5 mL（Butyl 4FF弱疏水层析预装柱，5 mL） |
20479ES08 |
5 mL |
600 |
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20480ES25/60/76 |
25mL/100mL/500mL |
600/1500/7000 |
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Phenyl FF(HS) Chromatography Column, 5 mL（Phenyl FF(HS)强疏水层析预装柱，5 mL） |
20481ES08 |
5 mL |
600 |
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20482ES25/60/76 |
25mL/100mL/500mL |
600/1500/7000 |
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Phenyl FF(LS) Chromatography Column, 5 mL（Phenyl FF(LS)强疏水层析预装柱，5 mL） |
20483ES08 |
5 mL |
600 |
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20484ES25/60 |
25mL/100mL |
800/2000 |
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20485ES08 |
5 mL |
700 |
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20486ES25/60 |
25mL/100mL |
800/2000 |
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Phenyl HP Chromatography Column, 5 mL（Phenyl HP强疏水层析预装柱，5 mL） |
20487ES08 |
5 mL |
700 |
