HiActi®细胞因子 | 人肠类器官培养案例
肠道是人体重要的消化器官，肠指的是从胃幽门至肛门的消化管，是消化器官中最长管道，人体肠道结构主要包括小肠和大肠。肠道疾病非常常见，如肠梗阻、慢性炎症性肠病、结直肠癌等，其中结直肠癌已成为威胁人类健康最严重的疾病之一。因此，肠道的研究是现在非常热门的领域，有着广阔的应用前景。
人肠类器官培养步骤
人肠类器官的培养
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重悬隐窝基质胶混合物，孔板中加入一定量的混合物和隐窝培养基（如24孔板（84013ES）可加入50 μL混合物和500 μL培养基）。
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用离心管转移到超净工作台里，PBS（含双抗60162ES）润洗2-3次，将肠粘膜转移至含有EDTA（2 mM）（60163ES）的溶液中，置于4℃，小肠消化约30 min，结肠消化约1h。
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将消化好的小肠粘膜转移至离心管中，加入PBS（60158ES），摇晃均匀后用70 μm的细胞过滤筛（84702ES）过滤，1000 rpm室温离心5 min，结肠隐窝无需过滤。
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弃上清，加入培养基重悬沉淀，计数，隐窝的数量约10个/μL为佳。
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加入一定量的悬液到离心管中，室温离心5 min。
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加入预冷的基质胶混合物（基质胶：培养基为2:1）重悬沉淀。
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将重悬液按一定量接种在预热的孔板中。
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每个孔加入一定量的预热的隐窝培养基，37℃培养1-2周。
人肠类器官的传代
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可按1：1 - 3：1进行传代培养。
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在培养板中，每孔加入一定量的培养基，用枪头将基质胶小心的刮出，取悬液，转移到离心管中。
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将要传代的隐窝置于冰上5-10 min。
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用枪头吹打基质胶，反复进行，直至基质胶被打碎，中间尽量避免气泡产生。
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将消化好的小肠粘膜转移至离心管中，加入PBS，摇晃均匀后用70 μm的细胞过滤筛过滤，1000 rpm室温离心5 min，结肠隐窝无需过滤。
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弃上清，加入培养基重悬沉淀，计数，隐窝的数量约10个/μL为佳。
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加入一定量的悬液到离心管中，室温离心5 min。
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加入预冷的基质胶混合物（基质胶：培养基为2：1）重悬沉淀。
人肠类器官的冻存
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将需要冻存的类器官置于冰上5-10 min。
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收集类器官，离心后弃上清。
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加入冻存培养液重悬类器官，分装至冻存管（84105ES）中，置于-80℃，24h后置于液氮中长期保存。
人肠类器官培养结果
用光学显微镜观察人肠类器官培养情况：
数据来源：Yeasen实验室
结果显示：人肠类器官具有光滑、完整的圆形或近圆形轮廓，边缘清晰，暗色的环状边缘包围着一个明亮的中心腔。
Yeasen产品推荐
HiActi®细胞因子
为支持人肠类器官相关研究，翌圣生物依托多年研发生产经验与技术积累，开发了一系列“三高一低”的HiActi®细胞因子，经过严格的质量控制及细胞功能的验证，确保产品具有高活性、高纯度、高稳定性、低内毒素水平，助您拿到理想的实验结果。
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HiActi®细胞因子 |
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名称 |
货号 |
推荐浓度 |
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Recombinant Human EGF Protein 重组人表皮生长因子 |
50 ng/mL |
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Recombinant Human Noggin Protein 重组人Noggin蛋白（液体） |
100 ng/mL |
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Recombinant Human IL-22 重组人白介素-22 |
2 ng/mL |
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Recombinant Human Wnt-3a protein 重组人Wnt3a蛋白（液体） |
100 ng/mL |
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Recombinant Human RSPO1/R-spondin-1 Protein 重组人RSPO1蛋白 |
500 ng/mL |
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其他产品
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类别 |
产品名称 |
货号 |
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抗体 |
Chromogranin A Rabbit mAb |
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Lysozyme Rabbit pAb |
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基质胶 |
Ceturegel® Matrix for Organoid culture，Phenol Red-Free，LDEV-Free基质胶 |
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小分子化合物 |
L-Alanyl-L-Glutamine |
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A83-01 |
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Nicotinamide |
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Primocin |
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SB-202190 |
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CHIR99021 |
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Y-27632 dihydrochloride |
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NAC |
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BP-1-102 |
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LY294002 |
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MK-2206 2HCl |
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Rapamycin |
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Prostaglandin (PG) E2 |
参考文献：
1. He G-W, Lin L, DeMartino J, Zheng X, Staliarova N, Dayton T, et al. Optimized human intestinal organoid model reveals interleukin-22-dependency of paneth cell formation. Cell Stem Cell 2022; 29(9):1333-1345.e1336.
