Cas9核酸酶是一种guide RNA引导的内切酶，可以催化双链DNA的裂解。这种靶向核酸酶是一种高精度的基因组编辑的有力工具。Cas9蛋白与CRISPR/Cas9系统的引导RNA（gRNA）成分形成一个非常稳定的核糖核蛋白（RNP）复合物。Cas9 RNP复合物可以在进入细胞后，通过添加一个核定位信号（NLS），立即定位到细胞核。YEASEN开发了NLS-Cas9-NLS核酸酶，该酶在蛋白的两端包含一个核定位序列（NLS），以增加入核切割效率。另外，与其他系统相比，Cas9 RNP复合物可以迅速从细胞中清除，最大限度地减少了脱靶切割的机会。这种无DNA的系统避免了将外源DNA插入基因组的风险，这对于基于基因编辑的疾病治疗非常有用。

产品特点如下：

无DNA：没有外部DNA添加。

高切割效率：双端NLS定位确保Cas9蛋白高效进入细胞核 。

低脱靶效应：Cas9 核酸酶的瞬时表达提高了切割的特异性。

节省时间：无需转录和翻译。

可应用于：通过体外DNA切割筛选高效和特异性靶向gRNA。

通过电穿孔或注射与特定 gRNA 结合时的体内基因编辑。

 

产品信息

货号	11362ES60/ 11362ES76
规格	100 μg / 500 μg
来源	重组Cas9来源于大肠杆菌
物种	化脓性链球菌
标签	His
浓度	4 mg/mL（100 μg）；4 mg/mL（500 μg）
反应温度	37℃
溶剂	10 mM Tris，300 mM NaCl，0.1 mM EDTA，1 mM DTT，50%甘油，pH7.4 at 25°C

 

组分信息

组分编号	组分名称	11362S60	11362S76
11362-A	NLS-Cas9-NLS Nuclease	100 μg（4 mg/mL）	500 μg（4 mg/mL）
11362-B	10X Reaction Buffer	1.5 mL	1.5 mL

注：10X Reaction Buffer 配方：200 mM HEPES, 1 M NaCl, 50 mM MgCl₂, 1 mM EDTA, pH 6.5 at 25°C

 

储存条件

-25~-15℃保存，有效期1年。

 

使用说明

体外DNA裂解实验推荐反应体系

组分	20 μL反应体系
10×Reaction Buffer	2 μL
Substrate DNA	2 μL（80 ng/μL）
NLS-Cas9-NLS Nuclease	2 μL-4 μL（25 ng/μL）
sgRNA	2 μL（50 ng/μL）
Nuclease-free water	To 20 μL

注意：

1. 溶液应充分混合，在37℃孵育1 h-2 h，然后加入1μL的蛋白酶K（20 μg/μL），在55℃孵30 min孵育结束后，用琼脂糖凝胶电泳检测消化效率。
2. 此反应条件仅为推荐量，Cas9 : sgRNA的比例，一般建议1:2-1:5之间进行摸索。
3. 设计3-6条sgRNA，筛选效率最高的sgRNA。

切割效率参考示意图：

按上表所述，20 μL的反应体系，在含有线性化质粒、gRNA 和Cas9的1×Cas9核酸酶反应缓冲液中在37°C下反应1小时，在琼脂糖凝胶电泳测定结果显示，线性化质粒的消化效率为97.37%，远高于90%。

 

注意事项

1. 本产品仅作科研用途。

2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

Ver.CN20230323