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Taq DNA聚合酶的非特异扩增是PCR实验中的常见问题，非特异扩增直接影响检测结果的判读并且会导致扩增灵敏度下降，甚至目标片段的得率下降等。利用酶修饰剂在常温下封闭Taq DNA聚合酶酶活中心，抑制常温下Taq酶的DNA聚合酶活性，是目前最有效抑制非特异性扩增的方式。翌圣开发的双封闭抗体，不仅可以封闭Taq DNA聚合酶的聚合酶活性，还能同时封闭Taq DNA聚合酶的外切酶活性，双管齐下，既能有效防止错配或引物二聚体引起的非特异性扩增，又能防止物料降解产生非特异信号，双重提升试剂特异性，使检测试剂在运输或室温使用过程中都能够从容应对。
图1.Yeasen双封闭热启动Taq酶抗体产品
注：产品专利号 - CN202010666417.7
产品特点
超强扩增特异性——双封闭抗体可同时封闭聚合酶和外切酶活性，有效避免非特异性扩增，提高特异性
卓越检测灵敏度——热启动形式可保证低丰度基因有效检出，灵敏度更高
优秀产品稳定性——37℃放置5天、4℃放置10天性能稳定
基线平稳线性好——解决了基线上漂问题，线性好
酶活释放速度快——95℃下加热20 s即可释放95%以上酶活
酶类适用范围广——野生型和突变型Taq酶均适用，每mg抗体可封闭4-10 KU Taq酶
产品性能
将合成的引物探针分别配于未封闭以及双封闭抗体封闭的Taq DNA聚合酶的反应液中，40℃反应，检测两者荧光信号，发现双封闭抗体可有效封闭Taq DNA聚合酶的外切酶活性。
图2.双封闭抗体外切酶活性封闭效率检测
分别用翌圣双封闭抗体以及T公司抗体对Taq 酶封闭后通过ARMS-PCR技术检测阳性样本，发现翌圣双封闭抗体封闭的Taq酶在ARMS-PCR扩增中分型准确，灵敏度更高。
图3.ARMS-PCR扩增曲线图
用传统封闭抗体与双封闭抗体分别封闭Taq DNA聚合酶，配置成含引物探针的全预混液，在4℃放置10天或在37℃放置1、3、5天，扩增10000拷贝ASF质粒，发现扩增曲线和Ct值无明显变化。
图4.4℃传统封闭抗体(A)、双封闭抗体(B)封闭反应液扩增10000拷贝ASF质粒扩增曲线图
图5.37℃传统封闭抗体(A)、双封闭抗体(B)封闭反应液扩增10000拷贝ASF质粒扩增曲线图
某些引物配合特定buffer和仪器时，会出现基线上漂的情况，但双封闭抗体能解决基线上漂问题，更有利于基线平稳。
图6.N基因(A)、ACT基因(B)扩增曲线图
用双封闭抗体封闭的反应液扩增100000、10000、1000、100拷贝ASFV/ACT双质粒，制作标准曲线。由图7可以看到，两者线性均良好。
图7. 双封闭反应液制作ASFV基因、ACT基因标准曲线图
分别用进口T公司抗体和翌圣双封闭抗体（Cat#31303）封闭Taq酶，并在95℃下热激20 s，检测酶活。可以看到95℃热激20 s后，31303可释放95%以上的酶活，与T公司抗体相当。
表1.95℃下热激20 s酶
翌圣双封闭抗体（Cat#31303）分别封闭三种类型Taq酶（野生型+2种突变型），封闭比例为1μg : 5U，测量荧光值以及封闭效率。发现对于不同类型的Taq酶，翌圣双封闭抗体（Cat#31303）封闭效果均较好。
表2.不同类型Taq酶的封闭效率
08 小鼠基因组残留检验
以水为模板作为阴性对照，小鼠基因组为模板作为阳性对照，扩增不同批次的31303，观察条带，发现样品未扩增出目的片段，说明抗体不存在小鼠基因组残留。
图8 小鼠基因组残留检测图
注：-为阴性对照，+为阳性对照，1-5为31303不同批次样品
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