产品描述

 

HEK-293T SV40gp6 (HEK-293TT) Cell Line是一种能过表达SV40 Large T的细胞株，特异性的与人乳头瘤病毒（HPV）结合，能很好的模拟HPV病毒感染细胞的路径。可用于中和抗体滴度测定、抑制剂筛选、病毒入侵研究以及HPV疫苗开发

本细胞系是将SV40 Large T过表达慢病毒感染293T细胞并筛选得到的稳定株。

 

保存方法

 

-80℃保存，如长期储存需保存–196°C以下。

 

使用方法

 

1、细胞复苏

a) 37℃水浴锅预热复苏培养基，加入预热后的复苏培养基5 mL至15 mL离心管。

b) 从液氮中取出冻存细胞并迅速放入37℃恒温水浴锅，将细胞液面浸至水面以下轻轻摇动解冻，直到刚刚融化（通常2-3分钟）。

c) 用70%乙醇擦拭冻存管外部以降低污染的几率。在生物安全柜或超净台中将冻存管中的细胞悬液转移到步骤a）的离心管中，轻轻混匀，176 × g，离心3 min，使细胞沉淀，弃上清。

d) 使用1 mL复苏培养基重悬，可取出部分使用台盼蓝染色计数活细胞，活细胞≥ 3 × 10⁶ cells/mL。

e) 通过补加复苏培养基的形式，调整细胞密度到1~2×10⁵ cells/mL，根据细胞悬液总体积，将细胞接种到合适的培养皿中。

注：

细胞复苏培养基：	DMEM+10% FBS+1%双抗
细胞生长培养基：	DMEM+10% FBS+1%双抗+0.75 μg/mL Puromycin
细胞冻存液：	90% FBS+10% DMSO

2、细胞传代

注：细胞复苏后的1至2代，使用复苏培养基，待细胞状态稳定后，再更换为含有抗生素的生长培养基。

1. 细胞为上皮细胞，贴壁生长。培养箱中孵育16-24 h后，镜下观察细胞贴壁情况，当细胞密度大于60%，即可进行细胞传代。推荐细胞传代比例为1:3-1:4，1-2天传代。
2. 将皿或培养瓶中的培养液弃去，10 cm皿加2 mL PBS润洗1次。
3. 弃PBS，加1 mL 0.25% Trypsin-EDTA消化液，37°C消化30-60 s，显微镜下观察。
4. 待细胞变圆，细胞间隙明显，部分细胞刚开始脱离瓶壁时，加1 mL左右生长培养基混匀终止消化，将细胞小心吹打下来，176 × g室温离心3 min。弃上清，细胞沉淀用生长培养基重悬，根据传代前细胞密度分盘（根据培养皿面积和细胞密度计算，传代后细胞密度为15-20%）

3、细胞冻存

a) 使用176 × g，3 min离心收集细胞。使用预冷细胞冻存液（90% FBS + 10% DMSO）重悬细胞，细胞密度调整为5 × 10⁶ cells/mL，每管1 mL分装到细胞冻存管中。

b) 拧紧盖子，适当标记后，将冻存管置于梯度降温盒中，-80℃下保存至少1天，尽快转移至液氮中。

 

细胞验证

1、不同亚型验证结果

Fig 1. 使用 1 μL不同HPV亚型的假病毒感染HEK-293T SV40gp6 (HEK-293TT) Cell Line后的检测结果

2、稳定性验证结果

Fig 2. 使用梯度稀释HPV16假病毒感染P5、P15、P25三个不同代次的HEK-293T SV40gp6 (HEK-293TT) Cell Line检测结果表明细胞的稳定性良好，不同代次的细胞被HPV感染的luciferase数值差异不大

3、SV40T氨基酸序列（NP_043127.1）

MDKVLNREESLQLMDLLGLERSAWGNIPLMRKAYLKKCKEFHPDKGGDEEKMKKMNTLYKKMEDGVKYAHQPDFGGFWDATEIPTYGTDEWEQWWNAFNEENLFCSEEMPSSDDEATADSQHSTPPKKKRKVEDPKDFPSELLSFLSHAVFSNRTLACFAIYTTKEKAALLYKKIMEKYSVTFISRHNSYNHNILFFLTPHRHRVSAINNYAQKLCTFSFLICKGVNKEYLMYSALTRDPFSVIEESLPGGLKEHDFNPEEAEETKQVSWKLVTEYAMETKCDDVLLLLGMYLEFQYSFEMCLKCIKKEQPSHYKYHEKHYANAAIFADSKNQKTICQQAVDTVLAKKRVDSLQLTREQMLTNRFNDLLDRMDIMFGSTGSADIEEWMAGVAWLHCLLPKMDSVVYDFLKCMVYNIPKKRYWLFKGPIDSGKTTLAAALLELCGGKALNVNLPLDRLNFELGVAIDQFLVVFEDVKGTGGESRDLPSGQGINNLDNLRDYLDGSVKVNLEKKHLNKRTQIFPPGIVTMNEYSVPKTLQARFVKQIDFRPKDYLKHCLERSEFLLEKR

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注意事项

 

1）细胞系产品干冰运输。

2）接触产品请带手套。请收到产品立即确认产品是否为冻存状态。

3）本产品相关实验，应在二级生物安全实验室或生物安全柜中进行。

4）本产品仅作研究用途！

 

Ver.CN20241212