正常骨髓中存在一定量的储存铁,以含铁血黄素的形式储存于组织巨噬细胞中,可供有核红细胞利用合成血红蛋白,这种存在于红细胞以外的储存铁称为细胞外铁;部分中、晚幼红细胞及少数成熟红细胞也含有铁颗粒,分别称为铁粒幼红细胞及铁粒红细胞,它们属于细胞内铁。
组织学中常使用普鲁士蓝法检测细胞内、外铁,其检测原理是:在酸性条件下亚铁氰化物能与铁离子(三价)结合形成蓝色的亚铁氰化铁沉淀(也即普鲁士蓝),定位于含铁部位,该法也是诊断学中检测灵敏度极高的一种铁染色方法。
本试剂盒适用于石蜡切片、冰冻切片、细胞染色。包括脑阔骨髓细胞涂片及血液细胞涂片的染色检查,另配备核固红做复染以区分含铁部位及细胞其他部位。
产品组分
组分编号 |
组分名称 |
产品编号/规格 |
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60533ES20(20 T) |
60533ES60(100 T) |
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60533-A |
Fixation Buffer固定剂 |
20 mL |
100 mL |
60533-B |
Potassium Ferrocyanide Solution亚铁氰化钾溶液 |
20 mL |
100 mL |
60533-C |
Acid Solution酸性反应液 |
20 mL |
100 mL |
60533-D |
Nuclear Fast Red solution 核固红溶液 |
20 mL |
100 mL |
运输和保存方法
冰袋运输。4 ℃避光保存。有效期1年。
注意事项
1)使用前应恢复室温,用前请摇匀试剂。
2)工作液现配现用。
3)所有玻片及器具应洁净、无铁污染(事先经除铁处理,尤其是载玻片),Perls stain染色时,应根据样本情况调整着色时间。
4)切片脱蜡应尽量干净。组织固定常采用10%中性福尔马林,经普通福尔马林长期固定后,组织会有损伤。避免使用酸性固定剂,铬酸盐处理也会妨碍铁的保存。
5)所有切片都应使用同一个阳性对照切片,选择适合的对照非常重要。尸检肺组织是一个很好的对照,包含相当数量的铁阳性巨噬细胞(心衰细胞)。
6)每次试剂使用后,请迅速盖好密封保存,以免挥发及影响效果。
7)本试剂盒仅限于形态学染色观察使用。
8)冰冻切片和细胞染色,最好根据具体情况摸索实验条件。
9)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
10)本产品仅用于科研用途。
使用方法
工作液配制
临用前,取B和C等量混合即为Perls stain,不宜提前配制。
样品染色
(一)石蜡切片染色:
1、组织固定于Fixation Buffer固定剂中,常规脱水包埋。
2、切片厚度4 μm,常规脱蜡至水。
3、蒸馏水水洗1 min。
4、切片入Perls stain (见注意事项3),浸染20~40 min。
5、蒸馏水充分冲洗2~5 min。
6、入核固红染色液,淡染细胞核1~5 min。
7、自来水冲洗1~5 s。
8、常规脱水透明,中性树胶封固.
(二) 冰冻切片染色:
1、无需脱蜡,直接迅速用蒸馏水冲洗2~3 min。
2、染色、封固步骤同石蜡切片的染色步骤,时间可以相应缩短。
(三)细胞染色:
1、Fixation Buffer固定剂固定10~20 min。
2、自来水冲洗2次,每次2 min。
3、蒸馏水冲洗2次,每次2 min。
4、染色、封固步骤同石蜡切片的染色步骤,但操作时间应相应延长。
结果参考
含铁血黄素或三价铁,结果呈蓝色;细胞核、其他组织,结果呈红色。
阴性对照
取相同切片脱蜡至水。入5%草酸孵育2~6 h,经Perls stain,其余步骤同上。结果为阴性。
相关产品
产品名称 |
货号 |
规格 |
60502ES50/60/76 |
50 ml/100 ml/500 ml |
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60504ES25 |
25 g |
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60505ES25 |
25 g |
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60506ES60 |
100 ml |
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60508ES25 |
25 g |
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Bromocresol Purple 溴甲酚紫 |
60509ES25 |
25 g |
60524ES60 |
2×100 ml |
HB210713