首页 / 抑制剂/激活剂 / 产品应用详情

如何使用潮霉素B筛选稳转株-----潮霉素B的应用

潮霉素B的作用原理

潮霉素B(Hygromycin B)是一种氨基糖苷类抗生素,由吸水链霉菌(Streptomyces hygroscopicus)代谢产生,通过破坏易位和促进80S核糖体的错读而抑制蛋白合成,从而杀死原核(如细菌)、真核(如酵母菌,真菌)和高等哺乳动物真核细胞。

目前常用于筛选和维持培养含潮霉素抗性基因的原核或真核细胞。

 

潮霉素B的应用

● 筛选和维持培养稳定转染Hph+载体的原核或真核细胞(植物细胞和哺乳动物细胞)

大肠杆菌(Escherichia coli.)来源的潮霉素抗性基因(hyg或hph),编码潮霉素B磷酸转移酶,将潮霉素B转化成不具有生物活性的磷酸化产物,从而起到解毒作用。针对这一原理,潮霉素B是一种非常有用的选择性标记,用来筛选和维持培养成功转染潮霉素抗性基因的原核或者真核细胞。

● 由于作用模式的差异,潮霉素B常与遗传霉素G418,博来霉素和杀稻瘟菌素s联合使用,筛选稳定转染两个不同载体的细胞株

它的作用模式与G418 (Cat#60220ES)、博来霉素(Cat#60257ES)和杀稻瘟菌素s (Cat#60218ES)不同,所以非常适合在双选实验中与另一种选择性抗生素联合使用。

● 抗病毒剂,由于潮霉素B选择性渗透进入因病毒感染增强通透性的细胞,而且具有抑制翻译的功效

● 作为驱虫药加入动物饲料中,饲养动物

● 潮霉素B用来筛选稳转株的工作浓度需要根据细胞类型,培养基,生长条件和细胞代谢率而变化,推荐使用浓度为50-1000 μg/mL。对于第一次使用的实验体系建议通过建立杀灭曲线(kill curve),即剂量反应性曲线,来确定最佳筛选浓度。一般而言,哺乳动物细胞50-500 μg/mL;细菌/植物细胞20-200 μg/mL;真菌200-1000 μg/mL。

 

潮霉素B的实验步骤

● 铺板:细胞培养至80-90%融合时,弃掉培养基,用1-2 mL PBS洗涤细胞两次,加入1mL Trypsin-EDTA溶液,充分洗涤细胞后,加入适量的胰蛋白酶消化液,将培养皿于37ºC放置数分钟使其在镜下大部分变圆即可终止消化,铺板密度约30%左右于5% CO2 37ºC 过夜培养。

● 根据细胞类型,设定合适的浓度梯度。如哺乳动物细胞,可设定50、100、250、500、750、1000 μg/mL。根据储存液的浓度进行对应的稀释操作。

● 维持Hygromycin B 浓度,隔天换液,镜下观察。7 天后,选择能将未转化的细胞完全杀死的最低Hygromycin B 浓度,为稳定转染细胞筛选用的工作浓度。

 

化学性质

潮霉素B是类白色至微黄褐色粉末,有特殊气味,为弱碱,易溶于水、甲醇、乙醇等,易与许多有机酸和无机酸生成盐。

 

保存方法

溶液直接存放在2℃~8℃,可存放6个月以上。

 

注意事项

● 携带hph基因转染的细胞对潮霉素有抗性,转染细胞稳定或暂时表达该基因。

● 潮霉素B的抗性基因(hyg或hph)除了来自E. Coli.之外,还发现于其他的菌株,包括Streptomyces hygroscopicus和Klebsiella pneumoniae。

 

产品推荐

翌圣生物的潮霉素B提供两种状态的产品,粉末(1 g/10 g)和溶液(50 mg/mL),货号分别为60225ES、60224ES。

 

产品名称          

产品编号

规格

价格(元)

Hygromycin B (50 mg/mL) 潮霉素B(50 mg/mL)

60224ES03

1 g (20 mL)

849.00

60224ES10

10×1 g (20 mL)

7396.00

Hygromycin B 潮霉素B 60225ES03 1 g 719.00
60225ES10 10 g 6599.00

 

客户使用该产品发表的科研文献(不完全统计:部分)

[1] Zhu G, Yu J, Sun Z, et al. Genome-wide CRISPR/Cas9 screening identifies CARHSP1 responsible for radiation resistance in glioblastoma[J]. Cell death & disease, 2021, 12(8): 1-9.  IF: 8.469

[2] Wang L, Wu W, Zhu X, et al. The ancient Chinese decoction Yu-Ping-Feng suppresses orthotopic Lewis lung cancer tumor growth through increasing M1 macrophage polarization and CD4+ T cell cytotoxicity[J]. Frontiers in Pharmacology, 2019, 10: 1333.  IF: 5.810

[3] Huang H, Zhong L, Zhou J, et al. Leydig‐like cells derived from reprogrammed human foreskin fibroblasts by CRISPR/dCas9 increase the level of serum testosterone in castrated male rats[J]. Journal of cellular and molecular medicine, 2020, 24(7): 3971-3981.  IF: 5.310

[4] Huang H, Zou X, Zhong L, et al. CRISPR/dCas9‐mediated activation of multiple endogenous target genes directly converts human foreskin fibroblasts into Leydig‐like cells[J]. Journal of cellular and molecular medicine, 2019, 23(9): 6072-6084.  IF: 5.310

[5] Cui Z, Zheng H, et al. Identification and Characterization of the Mitochondrial Replication Origin for Stable and Episomal Expression in Yarrowia lipolytica. ACS Synthetic Biology. 2021 Apr 16;10(4):826-835.  IF: 5.110

[6] Yao G, Chen X, Han Y, et al. Development of versatile and efficient genetic tools for the marine-derived fungus Aspergillus terreus RA2905[J]. Current Genetics, 2022: 1-12.  IF: 3.695

[7] Wang W Q, Tang W H. Generation of Fusarium graminearum Knockout Mutants by the Split-marker Recombination Approach[J]. Bio-protocol, 2018: e2976-e2976.

[8] An C, Wang M, Yao W. Exhausting hsa_circ_0072088 restrains proliferation, motility and angiogenesis of breast carcinoma cells through regulating miR-1236-3p and RRM2 in a ceRNA pathway[J]. Clinical Breast Cancer, 2022.  IF: 3.225

 

400-6111-883