利用RNA体外合成(IVT)技术制备的mRNA疫苗在COVID-19传染病的防治上产生了巨大的影响,无论是其开发生产周期以及疫苗的安全、高效性都明显优于传统疫苗,因此具有极大的发展潜力。
mRNA疫苗主要是体外合成RNA,是以DNA为模板通过体外转录得到,常用的是以线性化质粒DNA或PCR扩增产物为模板利用RNA聚合酶在体外转录合成再进行修饰获得。是利用含有T7启动子(TAATACGACTCACTATAGGG)或SP6启动子(ATTTAGGTGACACTATAG)序列的DNA为模板在含有T7或SP6 RNA聚合酶的条件下,以NTP为底物合成与模板DNA中一条链互补的mRNA,简单快速获得大量的mRNA分子,通过在5’端加上帽子结构和3’端加ployA尾加强mRNA的稳定性。
▲ 图2.体外转录(IVT)mRNA生产和装配过程[1]
体外合成RNA应用方向
体外合成RNA常见问题和困惑
T7Kit测试数据
<不同长度RNA转录>
<RNA转录品质测定>(安捷伦2100)
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参考文献