本产品适用于从细胞、动物组织（肝脏、肾脏、脾脏、脑、鼠尾等）中提取总RNA。采用独特的磁珠及精心优化的缓冲体系有效捕获释放的核酸，提取的核酸纯度高，质量稳定可靠，提取的核酸适用于RT-PCR、Northern Blot、体外翻译等实验。本产品配合自动化核酸提取仪器使用，可实现核酸的高通量提取。

 

试剂盒组分

编号	组分名称	18600ES50（50T）	18600ES60（100T）
18600-A	裂解液	23 mL	45 mL
18600-B	洗涤液A	44 mL	44 mL×2
18600-C	洗涤液B	18 mL	18 mL×2
18600-D	洗脱液	5 mL	10 mL
18600-E	磁珠悬浮液	1 mL×2	1 mL×4

18600ES50：使用前洗涤液A（18600-B）每瓶需加入44 mL无水乙醇，洗涤液B（18600-C）每瓶需加入72 mL无水乙醇

18600ES60：使用前洗涤液A（18600-B）每瓶需加入44 mL无水乙醇，洗涤液B（18600-C）每瓶需加入72 mL无水乙醇

 

运输与保存方法

室温运输，室温保存，有效期12个月。

 

注意事项

1. 试剂组分如有析出或浑浊（尤其冬季等室温为低温环境时），可45℃加热至溶液澄清。

2. 漂洗液、洗涤液首次使用时，需按标签注明的体积添加无水乙醇。

3. 洗脱时可能存在磁珠残留，吸取洗脱液时应尽量避免吸入磁珠。

4. 冻存样品应避免反复冻融，否则会导致样品中核酸的质量下降。

5. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

 

操作方法

根据样本量取相应体积的裂解液，向裂解液中加入β-巯基乙醇或二硫苏糖醇至终浓度为1%，裂解液现配现用。

 

样本前处理

1. 称取5-20 mg的组织样本，加入450 μL配制好的裂解液，充分匀浆，12000 rpm离心2 min后取上清液，得到样本裂解液。
2. 取不超过50万数量的细胞，离心去除上清液，加入450 μL配制好的裂解液，涡旋或用移液枪打散细胞，使细胞彻底裂解，静置5 min，得到样本裂解液。

细胞数量为50-100万时，离心去除上清液，加入500 μL配制好的裂解液，涡旋或用移液枪打散细胞，使细胞彻底裂解，静置5 min，得到样本裂解液。

 

手动法提取

1. 取450 μL样本裂解液至1.5 mL离心管中，加入400 μL异丙醇，20 μL磁珠悬浮液（若细胞数量为50-100万，取500 μL样本裂解液，加入400 μL异丙醇，40 μL磁珠悬浮液），充分涡旋振荡使磁珠完全分散，将离心管置于旋转混匀仪上混匀孵育10 min。

注意：磁珠悬浮液使用前需要充分摇匀。

2. 孵育结束后短暂离心，将离心管放置于磁力架上，直至磁珠完全吸附后，小心吸弃液体。
3. 向离心管中加入800 μL洗涤液A（请确认洗涤液A是否已添加无水乙醇），充分涡旋混匀1 min，然后将离心管放置于磁力架上，直至磁珠完全吸附后，小心吸弃液体。
4. （可选）如需去除DNA，向离心管中加入6 μL DNase Ⅰ，74 μL RDD缓冲液，短暂涡旋振荡使磁珠分散，室温放置15 min，期间每隔5 min涡旋混匀1次。
5. 重复步骤3一次。
6. 向离心管中加入800 μL洗涤液B（请确认洗涤液B是否已添加无水乙醇），充分涡旋混匀1 min，然后将离心管放置于磁力架上，直至磁珠完全吸附后，小心吸弃液体。
7. 重复步骤6一次。
8. 打开离心管盖，室温或37℃加热晾干至磁珠表面刚出现龟裂，注意不能过度干燥磁珠。
9. 向离心管中加入70 μL洗脱液，充分涡旋或移液器吹打使磁珠彻底分散，56℃加热5 min，期间涡旋混匀数次。
10. 将离心管放置于磁力架上，直至磁珠完全吸附后，将洗脱液溶液转移至无RNA酶的离心管中，注意不要吸到磁珠。核酸溶液保存于-80℃。

 

HB221027