产品简介

 

2× Hieff^® Ultra-Long PCR Master Mix (With Dye)有经过配体修饰的热稳定Taq DNA Polymerase，融合3’-5’校正活性因子以及优化的缓冲体系，能够扩增长达25 kb的基因组片段、14 kb的cDNA基因序列以及40 kb的λDNA片段。Mix中已包含扩增所需的dNTP、Mg²⁺，使用时只需加入引物和模板即可进行PCR反应，避免了加样过程产生的各种损耗，同时Mix还包含了染料部分，大大减少了后续电泳的繁琐步骤。此外，体系中加入的保护剂使得本产品经过反复冻融后仍可保持稳定的活性。PCR产物的3’端带A，可直接连接至T载体。

 

产品信息

 

货号	10159ES03 / 10159ES08 / 10159ES50
规格	1 mL / 5×1 mL / 50×1 mL

 

组分信息

 

组分编号	组分名称	10159ES03	10159ES08	10159ES50
10159-A	2× Hieff® Ultra-Long PCR Master Mix (With Dye)	1 mL	5×1 mL	50×1 mL
10159-B	25 mM MgSO4	500 μL	1 mL	5 × 1 mL
10159-C	10 mM dNTPs	100 μL	500 μL	5 × 1 mL

 

储存条件

 

-25~-15℃保存，有效期1年。

 

使用说明

 

1. 推荐PCR反应体系和扩增条件

组分	体积 (μL)
ddH2O	to 50 μL
2× Hieff® Ultra-Long PCR Master Mix (With Dye) *	25 μL
DNA模板**	适量
Primer正向 (10 μM)	2 μL
Primer反向 (10 μM)	2 μL

表1 扩增体系（50 μL）

 

循环步骤	温度 (°C)	时间	循环数
预变性	95℃	3 min	1
变性	98℃	10 sec	35
退火***	68℃	30 sec/kb
终延伸	72℃	10 min	1

表2 扩增条件

 

*反应缓冲液：缓冲液中含有2.5 mM Mg²⁺和优化的dNTPs成分。同时试剂盒配套提供额外的MgSO₄及dNTPs，对于20 kb以上较难扩增的片段，可尝试添加0.5-2 mM的Mg²⁺和200-500 μM的dNTPs。

**不同模板的推荐使用量：

模板种类	片段使用量范围（50 μL反应体系）
基因组DNA或大肠杆菌菌液	10–1,000 ng
质粒或病毒DNA	0.5-50 ng
cDNA	1-5 µL（不超过PCR反应总体积的1/10）

表3 不同模板的推荐使用量

 

***退火/延伸：扩增长片段建议使用两步法进行。退火/延伸时间设置30 sec/kb可扩增绝大部分片段，对于20 kb以上的片段扩增可适当延长反应时间，不宜超过60 sec/kb。

注意事项

1. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
2. 本产品仅作科研用途！

Ver.CN20240116