Hieff® Fast T4 DNA Ligase (2000 U/µL)

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产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

Hieff® Fast T4 DNA Ligase是一款可用于NGS建库过程中DNA片段和接头连接的单酶产品,该产品已经过高通量测序验证,质量优异。本酶具有高效的连接能力,非常适合复杂结构核酸片段的连接,比如华大平台的Ω接头。对于无需进行体系调整的客户,推荐选购Hieff NGS® Ultima DNA Ligation Module (Cat#12604),其核心组分即为本品。


产品组分

组分编号

组分名称

产品编号/规格

14952ES03

1 mL

14952ES10

10 mL

14952ES60

100 mL

14952

Hieff® Fast T4 DNA Ligase (2000 U/µL)

1 mL

10 mL

100 mL


单位定义

20 μL的连接反应体系中,6 μgλDNA-Hind Ⅲ分解物在16℃下反应30 min时,催化50%以上的DNA片段发生连接所需要的酶量定义为1个活性单位(U)


运输与保存方法

冰袋运输。-20保存,有效期2


注意事项

1. T4 DNA Ligase对物理变性敏感,混合时轻轻颠倒试管摇匀,请勿剧烈振荡;

2. 酶使用时宜存放在冰盒内或冰浴上,使用完毕后宜立即放置于-20℃保存;

3. 本产品仅做科研用途;

4. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

 

使用方法

1. 目前主流的合并法DNA建库试剂盒,其末端修复和加A处理后一般不纯化,直接进行接头连接。本试剂盒可与主流的商业化末端修复加A体系兼容,进行接头连接。反应体系请参考如下配制,涡旋瞬离后置于20℃,反应15 min即可。

1  Adapter Ligation体系

名称

体积(μL

dA-tailed DNA

60

10 × T4 DNA Ligase BufferCat#15821

10*

50% PEG 6000

10**

DNA Adapter

X***

Hieff® Fast T4 DNA Ligase (2000 U/µL)

0.2-1****

ddH2O

To 100

【注】:*试剂盒内未提供10 × T4 DNA Ligase Buffer,若需要可自行准备或推荐选购Yeasen Cat# 15821**试剂盒内未提供50% PEG 6000,需自行准备。

***接头用量参考表2

****Hieff® Fast T4 DNA Ligase用量可根据需要添加0.2-1 μL

2. Adapter的质量和使用浓度直接影响连接效率及文库产量。Adapter用量过高可能会产生较多Adapter Dimer;用量较低可能会影响连接效率及文库产量。表2列举了使用本试剂盒,不同Input DNA量推荐的Adapter使用量。

2  500 pg-1 μg Input DNA推荐的Adapter使用浓度

Input DNA

Adapter : Input DNA摩尔比

Input DNA

Adapter : Input DNA摩尔比

1 μg

10:1

50 ng

100:1

500 ng

20:1

25 ng

200:1

250 ng

40:1

1 ng

200:1

100 ng

100:1

500 pg

400:1

【注】:Input DNA摩尔数(pmol≈ Input DNA质量(ng)/ [0.66 × Input DNA平均长度(bp]

【接头添加计算举例】Input DNA100 ngInput DNA长度为300 bp时,接头应该添加多少?

第一步,计算Input DNA摩尔数。公式:Input DNA摩尔数(pmol≈ Input DNA质量(ng)/ [0.66 × Input DNA平均长度(bp]

Input DNA摩尔数(pmol=100 ÷0.66×300=0.5 pmol

第二步,计算接头添加摩尔数。根据表2查询接头添加比例;

根据表2,查得Input DNA 100ng时接头添加比例100:1,则接头添加摩尔数=100×0.5 pmol=50 pmol

第三步,计算接头添加体积。接头浓度=15 μmol/L(如使用其他接头,浓度需要依据其他接头浓度参数);

接头添加体积=接头添加摩尔数(50 pmol÷接头浓度(15 μmol/L=3.34 μL(注:15 μmol/L=15 pmol/μL

综上,接头可添加3.4 μL。(注:接头最大加入体积不超过5 μL

HB220930

400-6111-883