2023年9月2日，浙江大学乐敏课题组在National Science Review（IF=20.600）上发表研究论文“Genome degradation promotes Salmonella pathoadaptation by remodeling fimbriae-mediated proinflammatory response”，该论文使用翌圣一步法快速克隆试剂盒（Cat#10911）构建菌毛基因缺失株，以禽宿主专性病原——鸡白痢沙门菌为模型，探究基因组退化促进病原菌宿主适应的机制，揭示了病原菌宿主适应新机制。

目前关于基因组退化在影响病原菌致病行为方面的确切作用知之甚少，潜在的分子细节还有待研究。为了探究潜在的进化驱动因素，研究人员利用跨越一个多世纪的大规模全球禽类传染病——限制性鸡白痢沙门氏菌（bvSP）为模型，通过大量的基因组测序和大数据分析，证实了鸡白痢沙门菌在我国内普遍存在，特别是在华东地区影响较大。研究发现，我国鸡白痢沙门菌耐药情况十分严峻，鸡白痢沙门菌分离株对多种抗菌药表现出高度耐药性，高达97.29%的分离株对喹诺酮类药物高耐受。其中，抗微生物药物的基因型ST92在中国鸡群中越来越普遍。

本研究中，研究人员通过对全球458个bvSP基因组测序和大数据分析，构建了鸡白痢沙门菌的系统发育树，结果表明该菌株可分化为3个谱系，L1为祖先分支，L2和L3是逐步流行演化出的两个分支，且最近出现的两个谱系（L2/L3）的毒力增强。与中国一样，世界范围内主要优势型基因也为ST92。值得注意的是，最近分离的菌株携带更多的耐药基因和质粒。

鸡白痢沙门菌逐步增强毒性的进化（图片来自原文）

研究人员通过雏鸡与鸡胚感染试验和体外不利环境的模拟，发现鸡白痢沙门菌在进化过程中毒力逐渐增强，但对外界环境的生存能力逐渐下降；通过泛基因组分析精确地指出该菌的进化伴随着基因的缺失，即来自毒力谱系的菌毛退化。

集约化养殖和毒性克隆的出现（图片来自原文）

为了进一步探究菌毛基因的缺失与菌株进化的关系，研究人员利用CRISPR/Cas9协同同源重组技术构建了多个菌毛基因缺失株，通过亲本与突变株的差异比较发现，菌毛功能的丢失限制了粪口途径的水平传播，但增强了鸡白痢沙门菌的毒力。研究结果表明，bvSP通过菌毛功能的缺失减缓了宿主的促炎反应以实现免疫逃逸，同时通过增强鸡白痢沙门菌经卵途径的垂直传播，在我国集约化养殖模式的助推下形成高毒力且高传播力的克隆。证明了必不可少的毛状附属物是如何改变致病性的行为。强调了在农业集约化过程中，宿主限制病原体的毒力和传播是一种新的进化增强，为指导我国禽类流行病的控制和治疗提供新的思路和科学依据。

（截图来自原文）

翌圣一步法快速克隆试剂盒是一种利用同源重组的原理，进行无缝克隆的技术。该技术无需考虑酶切位点，将PCR产物定向克隆至任何载体的任何位点，可高效克隆50 bp-10 kb片段。操作过程简单快速，只需50°C，20 min即可完成反应。劲爆的是，多个片段也可以同时克隆哦！

近期的研究表明，6 μL体系，低剂量10 kb载体（40 ng）、1 kb片段（10 ng）条件下，10911ES、10922ES与竞品相比，依旧具有高性能，且阳性克隆率达100%，结果如图1所示。

图1.使用10911ES、10922ES和竞品Q进行单片段连接，10911ES、10922ES阳性率100%

A.重组转化平板图；B.阳性克隆检测电泳图

小翌助您克隆过关斩将，每天都出好数据。更多相关产品如下表所示，欢迎选购！