Nature | 翌圣克隆试剂盒助力揭示核仁超微精细结构与功能

分子克隆技术发展至今,从最经典的酶切酶连法到简便、快速的同源重组法,广受科研小伙伴的青睐!翌圣一步法快速克隆试剂盒(Cat#10911、10922)自上市以来,受到了众多小伙伴的支持!好评如潮!
 
小翌了解到使用翌圣一步法快速克隆试剂盒的最高分文章发表在Nature(IF 69.504)期刊,其余多篇发表在Nucleic acids research (IF 19.16)、Nature cell biology(IF 28.824)、Cell Metabolism(IF 31.373)。
 
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Nucleolar URB1 ensures 3′ ETS rRNA removal to prevent exosome surveillance

研究团队:中国科学院 陈玲玲研究组

发表期刊:Nature

影响因子:69.504

发表日期:2023年3月8日

研究背景:核仁通常表现为单一或多个匀质的球形小体,是真核细胞间期核中最显著的结构。核仁的主要功能是进行核糖体与RNA(rRNA)的合成。它包含数百种蛋白质,大多数核仁蛋白质的精确定位及其如何参与pre-rRNA加工等问题尚不清楚。

👉详情参考

URB1调控pre-rRNA 3’末端的折叠和加工(图片来自原文)

 

研究人员利用CRISPR/Cas9技术构建双色荧光标记的细胞系,利用高分辨率活细胞显微镜,通过筛选200个候选核仁蛋白,发现了12种蛋白向致密纤维组分外围富集。通过敲除URB1的斑马鱼等动物模型,发现12种蛋白中的关键蛋白URB1对维持该区域的完整性、锚定pre-rRNA 3’端及正确折叠加工起到至关重要的作用。该工作全面展示了核仁精细结构,关键蛋白与pre-rRNA的协同加工来维持核仁稳定,为深入研究核仁蛋白质提供了新的思路。

 

涉及克隆产品

(截图来自原文)

 

 
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翌圣生物一步法快速克隆试剂盒是一种利用同源重组的原理,进行无缝克隆的技术。该技术无需考虑酶切位点,将PCR产物定向克隆至任何载体的任何位点,可高效克隆50 bp-10 kb片段。操作过程简单快速,只需50°C,20 min即可完成反应。劲爆的是,多个片段也可以同时克隆哦!
 

反馈1:中国科学院病毒所

 
单片段连接:5033bp+1863bp
图1. 使用10922ES和竞品N*进行单片段连接,阳性率100%。
A:竞品N*转化平板。B:竞品N*重组转化平板。C:10922ES转化平板。D:10922ES转化平板
 

反馈2:中国农业科学院油料作物研究所

 
4片段连接:2853bp+2487bp+227bp+2137bp+331bp 
图2. 使用10922ES进行4片段连接
A:10922ES转化平板图。B:线性化载体与插入片段电泳图,M1为Yeasen DL5000;泳道1为片段A(2487 bp);泳道2、3为片段C(2137 bp);泳道4为线性化载体(2853 bp);泳道5为片段B(227 bp);泳道8为片段D(331bp)。C:阳性克隆检测电泳图,M2为ATG10kb,PCR检测大小为1883bp。

 

反馈3:安徽农业大学

 
单片段连接:8130bp+760bp
图3. 使用10922ES进行单片段连接
A:10922ES转化平板图。B:线性化载体电泳图,M1为Yeasen GoldBand 1 kb DNA ladder,泳道1、2、3为载体用EcoRI线性化。C:插入片段电泳图,M2为 DL2000 Plus DNA Marker,泳道1、2均为PCR产物。D:酶切检测重组载体,M1为1 kb Marker,泳道1、2、3、4均为酶切鉴定阳性克隆。
 
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产品定位

产品名称

产品货号

规格

单片段一步克隆

Hieff Clone® Plus One Step Cloning Kit一步法快速克隆试剂盒

10911ES20

20T

1-5片段一步克隆

Hieff Clone® Plus Multi One Step Cloning Kit 多片段一步法快速克隆试剂盒

10912ES10

10T

1-6片段一步克隆

Hieff Clone® Universal One Step Cloning Kit

10922ES20

20T

替代TA连接克隆

Hieff Clone® Zero TOPO-TA Cloning Kit 零背景TOPO-TA克隆试剂盒

10907ES20

20T

Hieff Clone®  Zero TOPO-TA Simple Cloning Kit, MCS-Depleted

零背景TOPO-TA克隆试剂盒(不含MCS多克隆酶切位点)

10908ES20

20T

替代平末端连接克隆

Hieff Clone® Zero TOPO-Blunt Cloning Kit 零背景TOPO-Blunt平末端克隆试剂盒

10909ES20

20T

Hieff Clone® Zero TOPO-Blunt Simple Cloning Kit

零背景TOPO-Blunt平末端克隆试剂盒(不含MCS多克隆酶切位点)

10910ES20

20T

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TOP10 Chemically Competent Cell TOP10化学感受态细胞

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10×100 μL

DH5α Chemically Competent Cell DH5α 化学感受态细胞

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