DNA甲基化与基因表达和基因功能密切相关,高效、准确地检测DNA甲基化对于生物学、遗传学、病理学、药理学、医疗诊断等多方面研究已经变得越发重要。最常用的检测DNA甲基化的方法是亚硫酸氢盐转化法。亚硫酸氢盐能转化未发生甲基化的胞嘧啶,通过脱氨基反应产生尿嘧啶磺酸盐,发生甲基化的胞嘧啶则不会被亚硫酸氢盐转化。转化后的DNA经过高效吸附核酸的磁珠结合,再通过洗涤、脱硫和洗脱等步骤富集得到磁珠上的DNA。
本试剂盒将DNA变性与亚硫酸氢盐转化合并为一步,转化反应时间需2.5 h;DNA投入量范围100 pg-2 μg; 未甲基化的胞嘧啶转化效率≥99.5%。转化后的产物适用于PCR扩增和NGS测序等下游应用。
组分信息
类别 |
组分编号 |
组分名称 |
12223ES10 |
12223ES50 |
12223ES70 |
Part Ⅰ |
12223-A |
转化液 |
1.2 mL×1 |
1.2 mL×5 |
1.2 mL×20 |
Part Ⅱ |
12223-B |
结合液 |
6.5 mL |
32 mL |
122 mL |
12223-C |
脱硫液 |
2.2 mL |
12 mL |
42 mL |
|
12223-D |
洗涤液 |
2.5 mL |
12.5 mL |
50 mL |
|
12223-E |
洗脱液 |
1 mL |
5 mL |
20 mL |
|
12223-F |
磁珠悬浮液 |
0.12 mL |
0.6 mL |
1.3 mL×2 |
注:10T:使用前洗涤液(12223-D)每瓶需加入10 mL无水乙醇
50T:使用前洗涤液(12223-D)每瓶需加入50 mL无水乙醇
200T:使用前洗涤液(12223-D)每瓶需加入200 mL无水乙醇
储存条件
Part Ⅰ组分2~8℃保存;Part Ⅱ组分常温保存。有效期12个月。
使用说明
手动操作说明
温度 |
时间 |
热盖105 ℃ |
On |
98 ℃ |
10 min |
64 ℃ |
2.5 h |
4 ℃ |
不超过20h |
【注】:此步骤非常关键,请务必保证完全干透但磁珠不干裂!
【注】:ddH2O也可进行洗脱;洗脱体积可根据实验需求相应调整。
注意事项
1. 转化液避免反复开盖,多次开盖可能影响转化效果,开盖使用后立即拧紧瓶盖。
2. 洗涤液首次使用时,需按标签注明的体积添加无水乙醇。
3. 洗脱时可能存在磁珠残留,吸取洗脱液时应尽量避免吸入磁珠。
4. 磁珠使用前需要用涡旋混匀器振荡混匀。
5. 需自备无水乙醇
6. 本产品仅作科研用途。
7.为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
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