Hieff® Mag DNA Methylation Bisulfite Kit 磁珠法DNA甲基化亚硫酸氢盐转化试剂盒

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产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

 

DNA甲基化与基因表达和基因功能密切相关,高效、准确地检测DNA甲基化对于生物学、遗传学、病理学、药理学、医疗诊断等多方面研究已经变得越发重要。最常用的检测DNA甲基化的方法是亚硫酸氢盐转化法。亚硫酸氢盐能转化未发生甲基化的胞嘧啶,通过脱氨基反应产生尿嘧啶磺酸盐,发生甲基化的胞嘧啶则不会被亚硫酸氢盐转化。转化后的DNA经过高效吸附核酸的磁珠结合,再通过洗涤、脱硫和洗脱等步骤富集得到磁珠上的DNA。

本试剂盒将DNA变性与亚硫酸氢盐转化合并为一步,转化反应时间需2.5 hDNA投入量范围100 pg-2 μg; 未甲基化的胞嘧啶转化效率≥99.5%。转化后的产物适用于PCR扩增和NGS测序等下游应用。

 

组分信息

类别

组分编号

组分名称

12223ES10

12223ES50

12223ES70

Part Ⅰ

12223-A

转化液

1.2 mL×1

1.2 mL×5

1.2 mL×20

Part Ⅱ

12223-B

结合液

6.5 mL

32 mL

122 mL

12223-C

脱硫液

2.2 mL

12 mL

42 mL

12223-D

洗涤液

2.5 mL

12.5 mL

50 mL

12223-E

洗脱液

1 mL

5 mL

20 mL

12223-F

磁珠悬浮液

0.12 mL

0.6 mL

1.3 mL×2

注:10T:使用前洗涤液(12223-D)每瓶需加入10 mL无水乙醇

50T:使用前洗涤液(12223-D)每瓶需加入50 mL无水乙醇

200T:使用前洗涤液(12223-D)每瓶需加入200 mL无水乙醇

 

储存条件

Part Ⅰ组分2~8℃保存;Part Ⅱ组分常温保存。有效期12个月。

 

使用说明

手动操作说明

  1. 转化
  1. 取出110 μL转化液于200 μL PCR管(八连管)中,加入40 μL DNA样本(若不足40 μL可用水补足),盖上管盖后,震荡混匀,瞬时离心,管盖上不要残留液体。
  2. PCR管(八连管)放入PCR仪,执行如下程序:

温度

时间

热盖105 ℃

On

98 ℃

10 min

64 ℃

2.5 h

4 ℃

不超过20h

  1. 纯化
  1. 转移转化后的DNA溶液到1.5 mL离心管中,加入600 μL结合液和10 μL磁珠, 1300~1500 rpm振荡30s;
  2. 室温孵育5 min后置于磁力架上进行磁分离至溶液完全澄清,使用枪头小心吸弃上清;
  3. 向离心管中加入400 μL洗涤液,1300~1500 rpm振荡30 s,置于磁力架上进行磁分离至溶液完全澄清,轻轻颠倒磁力架将离心管盖上的杂质洗落,瞬离,吸弃上清液;
  4. 向离心管中加入200 μL脱硫液,1300~1500 rpm振荡30 s,室温孵育15 min,置于磁力架上进行磁分离至溶液完全澄清,轻轻颠倒磁力架将离心管盖上的杂质洗落,瞬离,吸弃上清液;
  5. 向离心管中加入400 μL洗涤液,1300~1500 rpm振荡30 s,置于磁力架上进行磁分离至溶液完全澄清,轻轻颠倒磁力架将离心管盖上的杂质洗落,瞬离,吸弃上清液,重复本步骤一次;
  6. 将离心管转移至55 ℃金属浴孵育5~10 min,将磁珠完全晾干;

【注】:此步骤非常关键,请务必保证完全干透但磁珠不干裂!

  1. 加入35 μL左右洗脱液到磁珠中,1300~1500 rpm振荡30 s将磁珠重悬于洗脱液中,金属浴55 ℃加热5 min后置于磁力架上进行磁分离,回收上清液(即转化后的DNA溶液);

【注】:ddH2O也可进行洗脱;洗脱体积可根据实验需求相应调整。

  1. 洗脱的DNA溶液可以直接用于下游反应,或者保存于-20 ℃备用。

 

注意事项

1. 转化液避免反复开盖,多次开盖可能影响转化效果,开盖使用后立即拧紧瓶盖。

2. 洗涤液首次使用时,需按标签注明的体积添加无水乙醇。

3. 洗脱时可能存在磁珠残留,吸取洗脱液时应尽量避免吸入磁珠。

4. 磁珠使用前需要用涡旋混匀器振荡混匀。

5. 需自备无水乙醇

6. 本产品仅作科研用途

7.为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

 

产品性能

 

 

400-6111-883