产品简介

Human CD3 50 nm Nanobeads 可以用于基于 CD3抗原表达的人类细胞分离。CD3在所有T细胞上表达，并与T细胞受体相关。本产品由 CD3单克隆抗体与50 nm磁珠偶联而成，从而实现 CD3阳性T细胞的分选。

其原理是CD3 50 nm磁珠直接与细胞结合后，将细胞与磁珠混合悬浮液加载到放置在MACS Separator的分离磁铁中的MS或LS柱，或其他合适的分选柱中。磁分离后留在磁柱中的细胞即为阳性分选的CD3表达细胞，从而进行后续的相关实验研究；也可收集分离的下清液，即为阴性分选的无CD3表达细胞。 

 

产品信息

货号	37601ES05
规格	2 mL
分选能力	Up to 1×109 cells

 

产品性质

基质（Matrix）	葡聚糖纳米磁珠
配体（Ligand）	Anti-CD3 antibody
粒径（Particle Size）	水合粒径(DLS)：50 nm，投射电镜(TEM)：15-20 nm
分选能力（Separation Capacity）	Up to 5×108 cells/mL beads
储存缓冲液（Storage Buffer）	1 X PBS (pH7.2-7.4) containing 2 mM EDTA, 0.5% HSA buffer without Ca2+

 

储存条件

2~8℃保存，有效期6个月，严禁冻存。

 

使用说明

1. 所需材料准备

1. 分离缓冲液：1 X PBS (pH7.2-7.4) containing 2 mM EDTA, 0.5% HSA（人血清白蛋白）buffer without Ca²⁺，2~8℃保持冷却。

【注】：不推荐使用含有Ca²⁺或Mg²⁺的PBS。

        HSA可以被BSA（牛血清白蛋白）、人血清或胎牛血清（FBS）替代，EDTA可以被柠檬酸钠替代。

2. 分选柱和分离器：MS或LS柱，或其他合适的分选柱。MACS Separator的分离磁铁。

2. 样品准备

1. 确定细胞数。
2. 将细胞悬浮液在300 g 转速下离心 10 分钟，完全吸取上清液。

3）按照1x10⁷个细胞用 80μL 缓冲液重悬细胞颗粒 (可以提前用30 μm细胞过滤网去除粘连的、大块装的细胞), 每1x10⁷个细胞加入20 μL CD3分选磁珠，用于 CD3阳性细胞分离。如果希望同时标记CD3和另一种CD蛋白，建议使用 60μL 缓冲液重悬细胞颗粒，并加入20 μL CD3分选磁珠和20μL另一种CD蛋白的抗体分选磁珠。(每1x10⁷个细胞)

4）混合均匀，并在冰箱中孵育15分钟(2~8℃)。

5）每 1x10⁷细胞加入1-2 mL的缓冲液清洗细胞，然后300 g离心10分钟，完全吸出上清液。

6）在500 μL的缓冲液中重新悬浮最多1x10⁸个细胞，对于 1x10⁷或更少的细胞重悬于50 μL的缓冲液中，对于更高的细胞数量，相应地增加缓冲液体积。

3. 磁性细胞分离

1）使用MS或LS柱进行磁分离。

2）将分选柱置于合适的MACS Separator的分离磁铁中。

3）用适量缓冲液冲洗色谱柱，MS: 500 μL，LS: 3 mL。

4）将细胞悬浮液滴在分选柱上，收集含有未标记细胞的流出液。

5）用适量缓冲液冲洗分选柱，收集通过的未标记细胞，并与步骤4）的流出液混合。MS: 3X500 μL，LS:3x3 mL。

【注】：一旦分选柱储液器空，就立即加入等量的缓冲液进行清洗步骤。

6）从分离磁铁中取出分选柱，将其置于合适的收集管中。将适量的缓冲液移到分选柱上。将柱塞推入分选柱并冲出磁性标记的细胞。MS:1 mL，LS:5 mL。

7）然后可以对细胞进行计数，并分析以评估其纯度或用于下游应用。不需要移除分选磁珠。为确保细胞活性，应将所需的细胞立即重新悬浮在细胞培养基中。

 

注意事项

1. 本产品仅作科研用途！

2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。