肝脏是人体中最大的器官之一，来源于内胚层中前肠上皮细胞发育而来的肝芽结构，以代谢功能为主，发挥“解毒”作用。肝功能失衡会导致称为肝衰竭的病理状况，并导致肝炎、纤维化、肝硬化、癌症、代谢或自身免疫性疾病。因此，为充分了解每种肝病的表型和损伤器官的机制，我们需要体外个性化肝模型系统进行疾病建模、药物发现和药物毒性学习。
肝脏类器官(hepatic organoids, HLO, HO)是肝脏功能的3D模型，保留了肝细胞的主要生理特征。在存在或不存在基质的情况下，可以从iPSC、ESC或特定的成体细胞（例如上皮细胞或上皮细胞和间充质细胞）生成类器官。
我们根据JCI Insight[1]、Cell Metab[2]和J Hepatol[3]发表的三篇文章，整理了由人类诱导多能干细胞(human iPSCs)生成肝脏类器官的培养方案。
图1.iPSC分化为肝类器官的过程(PMID: 28878125)[1]
A：iPSC分化为肝类器官的示意图；B-C：在第0天(iPSCs)、第3天（定形内胚层，EN）、第6天（前肠，FG）、第9天（成肝细胞，HB)、第20天(HO1)和第62天(HO2)在HO发育过程中发生的形态学和细胞标记变化。
iPSC在含有5 mM EDTA和10 mM Y-27632的缓冲液解离为单个细胞，接种到低吸附的6孔板上，然后用含有激活素A (100 ng/mL)和BMP4 (10 ng/mL)的RPMI-1640培养基培养3天；
更换为含有2% Matrigel和B27的RPMI培养基；第3 -6天，培养基中加入50 ng/mL FGF10；第6-9天，培养基中加入10 ng/mL FGF10和10 ng/mL BMP4；
第9天后，更换为含有1% Matrigel、50 ng/mL HGF、50 ng/mL oncostatin M和10 μM Dexamethasone的类器官生长和分化培养基(HCM)中。
图2.iPSC分化为肝类器官的过程(PMID: 31155493)[2]
A：iPSC分化为肝类器官的示意图；B：在第0天(iPSCs)和第20天(HLO)明场图像。
在第20天收集培养物，将细胞解离，200 g离心3 min收集细胞，重悬于50 μL GFR-Matrigel中，接种到24孔板中。Matrigel凝固后，加入1 mL生长培养基(RPMI-1640, B27, 250 nM LDN-193189, 3 μM CHIR99021, 10 μM A83-01, 100 ng/mL EGF, 10 ng/mL FGF10和20 ng/mL HGF)，培养细胞6天，更换为分化培养基(HCM medium, 10 μM DAPT, 10 ng/mL oncostatin M, 20 ng/mL HGF, 10 μM Dexamethasone, 10 ng/mL BMP4)再培养6天。
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产品名称 |
产品编号 |
规格 |
简介 |
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53006ES |
1 mg/5 mg/10 mg |
ROCK抑制剂 |
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53003ES |
2 mg/5 mg/10 mg |
GSK-3α/β抑制剂 |
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53269ES |
250 mg/500 mg/1 g |
糖皮质激素受体激动剂 |
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53012ES |
5 mg/10 mg |
BMP信号通路抑制剂 |
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53002ES |
1 mg/5 mg/10 mg |
TGF-β信号抑制剂 |
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52104ES |
10 mg/50 mg |
Notch通路抑制剂 |
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92053ES |
10 μg/100 μg/500 μg |
重组蛋白 |
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92708ES |
100 μg/500 μg |
重组蛋白 |
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91702ES |
10 μg/100 μg/500 μg |
重组蛋白 |
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91303ES |
5 μg/100 μg/500 μg |
重组蛋白 |
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91306ES |
5 μg/100 μg/500 μg |
重组蛋白 |
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92055ES |
10 μg/50 μg/1 mg |
重组蛋白 |
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92254ES |
10 μg/100 μg/500 μg |
重组蛋白 |
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60706ES |
5 mL |
用于细胞和组织体外培养 |
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60117ES |
100 mL |
化学缓冲剂 |
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60370ES |
10 g/100 g |
抗氧化 |
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36102ES |
25 g/100 g/500 g/1 kg |
用于细胞培养 |
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60704ES |
10 mL |
无血清添加剂 |
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Ceturegel® Matrix for Organoid culture，Phenol Red-Free，LDEV-Free 基质胶 |
40191ES08/10 | 5mL/10mL | 类器官 |
[1] Guan Y, et al. Human hepatic organoids for the analysis of human genetic diseases. JCI Insight
. 2017 Sep 7;2(17):e94954.
[2] Ouchi R, et al. Modeling Steatohepatitis in Humans with Pluripotent Stem Cell-Derived Organoids. Cell Metab. 2019 Aug 6;30(2):374-384.e6.
[3] Mun SJ, et al. Generation of expandable human pluripotent stem cell-derived hepatocyte-like liver organoids. J Hepatol. 2019 Nov;71(5):970-985.
