本试剂盒采用比色法测定丙酮酸激酶（PK）的活性，测定原理如下：丙酮酸激酶（PK）在ADP存在下可催化PEP产生丙酮酸，丙酮酸再由LDH将其转变为乳酸，同时将NADH变为NAD。
该方法的优点包括快速简便，适用于检测各种动物血清（浆）、组织等样本中的丙酮酸激酶（PK）活力。
产品信息
| 货号 | 60430ES50 |
| 规格 | 50 T |
| 检测范围 | 1.3-250 U/L |
组分信息
| 组分编号 | 组分名称 | 装量 | 储存条件 |
| 60430ES-A | 试剂一 | 60 mL | 2～8℃ |
| 60430ES-B | 试剂二 | 粉剂2支 | -25～-15℃ |
| 60430ES-C | 试剂三 | 10 mL | 2～8℃ |
| 60430ES-D | 试剂四 | 粉剂4支 | -25～-15℃ |
| 60430ES-E | 试剂五 | 粉剂×4支 | -25～-15℃ |
备注：
1）试剂一：试剂一为混悬液，使用前需混均匀，否则结果会有偏差。
2）试剂二：每支用时加双蒸水1.4 mL，用不完放-25～-15℃以下保存3～7天。(如果样本量少，可以将配好的1.4 mL再分成2～3管放-25～-15以下保存，每次取一管用，以免反复冻融)
3）试剂四：用时每支加双蒸水320 µL，用不完放-25～-15℃以下保存。
4）试剂五：用时每支加双蒸水650 µL，用不完放-25～-15℃以下保存。
使用说明
1.仪器试剂准备
可调340 nm波长的紫外分光光度计、0.5 cm光径石英比色皿、涡旋混匀器、37℃水浴锅、秒表、蒸馏水、生理盐水、蛋白测定试剂。
2.样本前处理
1）组织样本：
准确称取组织重量按重量（g）:体积（mL）= 1:9的比例，加入9倍体积的生理盐水，冰水浴条件下机械匀浆，制成10%匀浆，2500转/分，离心10分钟，取上清再用生理盐水稀释成适当浓度匀浆上清待测，取得的上清液需测蛋白浓度。
2）血清/浆样本：
直接检测。
3.操作表
| 试剂 | 测定管 | 对照管 |
| 试剂一（mL） | 1.0 | 1.0 |
| 试剂二（mL） | 0.05 | 0.05 |
| 试剂三（mL） | 0.05 | 0.05 |
| 试剂四（mL） | 0.025 | 0.025 |
| 试剂五（mL） | 0.05 | 0.05 |
| 混匀后，37℃预温10分钟 | ||
| 双蒸水（mL） | 0.02 | |
| 样本（mL） | 0.02 | |
| 加样本的同时开始计时，快速混匀后，波长340 nm，0.5 cm光径的石英比色皿，双蒸水调零，测定30秒时记录吸光度A1值，然后将比色皿中的反应液倒入预先编号的原试管中，放入37℃水浴箱中准确水浴15分钟，然后取出试管测定15 分30秒时的吸光度A2值,计算△A=A1-A2。 | ||
备注：
因试剂太贵，一般情况下对照管可以不做（对照管很稳定，除非实验精确性要求很高），所以只需做测定管 15分钟前后的吸光度OD值之差。
4.计算公式
1）血清/浆的计算公式：
单位定义：在 37℃，pH 7.6的条件下，每升血清/浆每分钟将1 µmoL的PEP转变成丙酮酸为一个酶活力单位。
丙酮酸激酶活力（U/L）= ΔA ÷（6.22×T×d）×（V反总/V样）×1000
其中，ΔA ：表示吸光度的变化值；6.22：表示是PEP（磷酸烯醇式丙酮酸）的毫摩尔消光系数；T：表示反应时间，15分钟；d：表示是比色光径，0.5厘米；V反总：表示是反应液总体积，1.195 mL；V样：表示取样量，0.02 mL；
1000是用于将mmol转换为μmol的转换因子。
2）组织的计算公式：
② 按蛋白浓度计算：
单位定义：在37℃，pH 7.6的条件下，每克组织蛋白每分钟将1 µmol的PEP转变成丙酮酸为一个酶活力单位。
丙酮酸激酶活力（U/gprot） = ΔA ÷（6.22×T×d）×（V反总/V样）÷ Cpr
其中：Δ6.22：表示是PEP（磷酸烯醇式丙酮酸）的毫摩尔消光系数；T：表示反应时间，15分钟；d：表示是比色光径，0.5厘米；V反总：表示是反应液总体积，1.195 mL；V样：表示取样量，为0.02 mL；Cpr：表示组织匀浆蛋白浓度，gprot/mL（prot 指蛋白）。
2～8℃保存，有效期3个月。
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