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COA
已发表文献
Hieff Unicon® Lyo Multiplex One Step RT-qPCR Kit是以RNA为模板进行多重定量PCR反应的试剂盒，已经添加了冻干保护剂，可用于冻干。
产品组分
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组分编号 |
组分名称 |
13667ES60 (100 T) |
13667ES80 (1000 T) |
13667ES92 (10000 T) |
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13667-A |
4×Hifair® V Lyo-Buffer |
600 μL |
6 mL |
60 mL |
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13667-B |
MgCl2（25 mM） |
500 μL |
5 mL |
50 mL |
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13667-C |
10×Hifair® V Lyo-Enzyme Mix |
10 μL |
100 μL |
1 mL |
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13667-D |
冻干保护剂 |
700 μL |
7 mL |
70 mL |
【注】10×Hifair® V Lyo-Enzyme Mix主要包含有耐热Hifair® V Reverse Transcriptase和UNICON® HotStart Taq DNA Polymerase。
运输与保存方式
1.运输方式：冰袋运输。
2.保存方式：Part 1：13667-A【4×Hifair® V Lyo-Buffer】-20℃保存，有效期1年。
13667-D【冻干保护剂】-20℃保存，有效期1年。
Part 2：13667-B【MgCl2（25 mM）】 4℃保存，有效期3年。
13667-C【10×Hifair® V Lyo-Enzyme Mix】4℃保存，有效期6个月。
3.本品避免反复冻融。建议分装保存。
反应体系
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组分 |
体积（μL） |
终浓度 |
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4×Hifair® V Lyo-Buffer |
6 |
1× |
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Hifair® V Lyo-Enzyme Mix |
0.1 |
- |
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MgCl2 (25 mM) |
2.5 |
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冻干保护剂 |
7 μL |
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Primer Mix (10 μM) |
各0.4 |
0.2 μM |
|
Probe Mix (10 μM) |
各0.2 |
0.1 μM |
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模板 RNA |
1-5 μL |
- |
|
RNase Free H2O |
to 25 μL |
- |
【注】：使用前务必充分混匀，避免剧烈震荡产生过多气泡。
a) 引物浓度：Primer Mix中包含多对引物，通常每条引物终浓度为0.2 μM，也可以根据情况在0.1-1.0 μM间进行调整。
b) 探针浓度：Probe Mix中包含多条不同荧光信号的探针，每条探针的浓度可根据具体情况在50-300 nM间调整。
c) 模板稀释：qPCR灵敏度极高，建议将模板进行稀释使用，控制Ct值在20-35之间适宜。
d) 反应体系：推荐使用25 μL或50 μL，以保证目的基因扩增的有效性和重复性。
e) 体系配制：请于超净工作台内配制，并使用无核酸酶残留的枪头、反应管；推荐使用带滤芯的枪头。避免交叉污染和气溶胶污染。
参考扩增程序
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反应阶段 |
温度 |
时间 |
循环数 |
|
|
1 |
逆转录 |
50℃a |
10 min |
1 |
|
2 |
预变性 |
95℃ |
5 min |
1 |
|
3 |
扩增反应 |
95℃ |
15 sec |
45 |
|
60℃b |
30 secc |
【注】
a) 逆转录：42℃或者50℃均可，时间 10-15 min。
b) 扩增反应：扩增反应温度根据设计的引物Tm值进行调整。CDC官方推荐的ORF1ab和N引物，退火温度建议≥60℃。
c) 荧光信号采集：不同的qPCR检测仪器所需的荧光信号采集时间不同，请根据最短时间限制进行设置。
注意事项
1.辅料配方发生微量的变化，需重新测定冻干参数，并做相应调整。
2.冻干设备要求：
冷阱盘管表面温度≤-60℃
板层温度≤-45℃，温度均一性±1℃（性能详细说明及验证方案咨询翌圣生物技术人员）
可做压升测试（冻干生产前，做泄漏率测试）
3.环境要求：
溶液分装及配置尽量在万级层流保护下进行，环境空间尘埃掉落进溶液中成为冻干过程的晶核，影响溶液的结晶的过冷度，导致产品质量不一致性。
4.真空控制
掺气方式：建议掺入气体为高纯氮气
5.冻干试剂 MIX 工艺参数设定参考（冻干设备升华效率≥1mm/小时）
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温度 |
斜率时间 |
时间 |
真空 Pa |
备注 |
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|
预冻 |
1 |
-45℃ |
—— |
2 h |
—— |
常温最快速率降温 |
|
2 |
-45℃ |
—— |
—— |
保持，根据包材验证保持时间 |
||
|
真空 |
3 |
-45℃ |
—— |
15 |
||
|
升华阶段 |
4 |
-40℃ |
10 h |
15 |
无斜率控制型冻干机，可分6个阶段升温 |
|
|
5 |
0℃ |
2 h |
0 h |
15 |
||
|
6 |
25℃ |
2 h |
4 h |
15 |
无斜率控制型冻干机，可分6个阶段升温 |
|
|
解析干燥 |
7 |
30℃ |
2 h |
0 |
||
|
含水量控制 |
8 |
压升测试重试时间：30 min |
压升测试：2 min<5 Pa |
|||
6.实验过程中请使用RNase free耗材。
7.为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
8.本产品仅作科研用途！
相关产品
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产品名称 |
货号 |
规格 |
|
10×Hieff Unicon® V Lyo-nCoV Multiplex One Step RT-qPCR Kit (with MgCl2) |
13168ES60 |
100 T |
|
13168ES80 |
1000 T |
|
|
13168ES92 |
10000 T |
|
|
11301ES12 |
12 KU |
|
|
11301ES75 |
300 KU |
|
|
10724ES01 |
100 μL |
|
|
10724ES94 |
1 mL |
|
|
10724ES95 |
25 mL |
|
|
10724ES96 |
100 mL |
|
|
10701ES05 |
2 KU |
|
|
10701ES10 |
10 KU |
|
|
10701ES20 |
20 KU |
|
|
10701ES60 |
100 KU |
HB210715
