产品规格：24 T
产品价格：¥ 616
类别：磁珠
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产品信息
产品名称
产品编号
规格
价格/元
Hieff NGS® mRNA Isolation Master Kit
mRNA纯化试剂盒
12603ES24
24 T
616
12603ES96
96 T
2266
产品描述
Hieff NGS® mRNA Isolation Master Kit是翌圣生物自主研发的专门用于纯化mRNA的磁珠试剂盒。其中的mRNA Capture beads为偶联了Oligo（dT）的微米级顺磁性微球，通过与带有poly（A）尾巴的mRNA相结合，将mRNA从10 ng-4 μg完整度良好的总RNA中进行分离纯化。
产品组分
产品组分
组分名称
12603ES24
12603ES96
12603-A
mRNA Capture Beads
1.2 mL
4.8 mL
12603-B
Beads Binding Buffer
1.2 mL
4.8 mL
12603-C
Beads Wash Buffer
15 mL
60 mL
12603-D
Tris Buffer
1.2 mL
4.8 mL
12603-E
Nuclease-free water
1 mL
4 mL
运输与保存方法
冰袋运输。
2-8℃保存，有效期一年。避免冷冻！
注意事项
1.磁珠使用前务必要回温至室温，并充分混匀，否则可能影响样品的回收效率。
2.操作过程要严格保证无RNase和核酸污染。
3.本产品和其他试剂配套使用时，请按照具体实验说明来进行操作。
4.想要获得好的纯化效果，需要有完整度良好的总RNA，确保RIN值在7.0及以上。
5.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
6.本产品仅用作科研用途！
使用方法
自备材料
磁力架，Nuclease-free离心管。
操作流程
图1 mRNA纯化试剂盒操作流程
操作步骤
3.1 实验前准备
将mRNA Capture Beads从2-8℃取出，静置使其温度平衡至室温（约30 min）。
3.2 样本准备
在一个Nuclease-free PCR管中，用Nuclease-free water将10 ng-4 μg总RNA稀释至50 μL，冰上放置备用。
3.3 mRNA与磁珠的结合
① 颠倒或涡旋振荡混匀磁珠，吸取50 μL磁珠悬液加入至50 μL 总RNA样品中，用移液器反复吹打6次，
使其充分混匀。
② 将磁珠与RNA的混合物置于PCR仪中，65℃，5 min；25℃，5 min；25℃，hold，完成RNA与捕获磁珠的结合。
③ 将样品置于磁力架中，室温静置5 min，使mRNA与总RNA分离，小心移除上清。
3.4 样本的洗涤
① 将样品从磁力架上取出，加入200 μL Beads Wash Buffer重悬磁珠，用移液器反复吹打6次以彻底混匀。
② 将样品置于磁力架中，室温静置5 min，小心移除上清。
③ 重复上一步骤，共洗涤两次。
3.5 mRNA样本第一轮洗脱
① 将样品从磁力架上取出，加入50 μL Tris Buffer重悬磁珠，用移液器反复吹打6次以彻底混匀。
② 将样品放置于PCR仪中，80℃，2 min；25℃，hold，将mRNA洗脱下来。
3.6 mRNA与磁珠的再次结合
① 将样品从PCR仪中取出，加入50 μL Beads Binding Buffer，用移液器反复吹打6次以彻底混匀。
② 室温孵育5 min，使mRNA结合到磁珠上。
③ 将样品置于磁力架中，室温静置5 min，小心移除上清。
3.7 样本的洗涤
将样品从磁力架上取出，加入200 μL Beads Wash Buffer重悬磁珠，用移液器反复吹打6次彻底混匀，将样品重新放回至磁力架中，室温静置5 min，然后吸除全部上清。
【注】：最后需要用10 μL移液器吸干净残留液体。
3.8 mRNA样本终洗脱
方案一：用于逆转录反应。
将样品从磁力架上取出，加入12 μL Nuclease-free water重悬磁珠，用移液器吹打6次以彻底混匀。将样品置于PCR仪中80℃，2 min后，立即置于磁力架上，室温静置5 min。待溶液澄清后，小心吸取10 μL上清至另一新的Nuclease-free PCR管中。
方案二：用于RNA文库的构建。
可根据相关试剂盒说明书加入相应体积的Frag/Primer Buffer，进行文库构建。
【注】：样品可置于冰上继续进行NGS文库构建或其他分析应用（建议立即进行后续反应），也可以置于-80℃保存。
HB220218