近日，翌圣生物科技（上海）股份有限公司（以下简称“翌圣生物”）收到美国食品药品监督管理局（以下简称“FDA”）的确认函，公司递交的T7 RNA polymerase的DMF资料已被美国FDA接收，获得备案编号，完成了DMF备案。如需引用DMF编号，请发邮件至marketing@yeasen.com提出授权申请，与您确认后，我们将向您提供DMF授权书。翌圣生物更多产品正在申报美国FDA DMF备案，欢迎来电、来函咨询。统一客服电话400-6111-883。

 

 

进行FDA DMF备案的目的是什么？
 

DMF（Drug Master File）是DMF持有者递交给FDA的存档文件，内容包含用于人体的药物产品在生产、加工、包装和储存过程中用到的生产设施、工艺流程、质量控制及其所用原料、包装材料等详细信息。DMF持有者向FDA递交DMF的主要目的是支持用户向FDA提交的各种药品申请（一种或多种临床研究申请（IND）、创新药申请（NDA）、仿制药注册（ANDA）、出口申请、以及上述各种申请的修正和补充）。FDA对递交的DMF资料进行存档处理，以备审查。DMF持有者只需向用户提供授权书，授权FDA在评审用户的药品申请时，对所涉及的DMF进行全面考查。这样的DMF制度使药物申报者可以直接使用DMF备案编号来代替申报过程中需要提供有关原料和辅料的具体信息，节约了审批成本，提高了审批效率，同时还能缩短注册周期。

 

什么是T7 RNA polymerase？
 

T7 RNA polymerase能以含有T7启动子序列的双链DNA为模板，以NTPs为底物，合成与启动子下游单链DNA互补的RNA，因此，T7 RNA polymerase常应用于体外合成长转录本和短转录本。双链线性平末端或5’突出末端DNA均可作为T7 RNA polymerase的转录模板，因此线性质粒、PCR产物均可用作体外合成RNA的模板。翌圣生物可为您提供GMP级别的T7 RNA polymerase，以1 μg的模板投入量可以产生 100-200 μg的RNA。

 

常见问题及解决方案 
 

1. 转录产物产量低

模板的质量与产量密切相关，实验组产量明显低于对照组可能原因有：

①实验模板中有抑制反应成分；

②实验模板本身原因。

建议：

①重新纯化模板；

②确定模板定量以及其完整性；

③延长反应时间；

④加大模板投入量；

⑤尝试其它的启动子和RNA聚合酶。

2. 短转录本产量低

转录起始片段短会抑制反应，转录产物小于100nt 时，延长反应时间至 4-8 小时或增加模板量至2ug可以提高RNA产量。

3. RNA 转录长度大于预期

如果电泳显示产物条带大于预期大小，可能原因：

①质粒模板可能没有完全线性化；

②有义链3’端为突出结构；

③RNA存在未完全变性的二级结构。

建议：

①检查模板是否完全线性化，如有必要，额外进行线性化；

②选择合适的限制性内切酶，避免产生有义链3’ 端突出，或者用 Klenow Fragment 或 T4 DNA 聚合酶补齐后，再进行转录；

③使用变性胶检测RNA 产物。

4. RNA 转录长度小于预期

如果电泳显示产物条带小于预期大小，可能原因：

①模板包含类似于T7 RNA聚合酶的终止序列；

②模板中GC含量高。

建议：

①降低反应温度（比如，30℃），有时降低温度可以增加转录长度，但会降低产量。或者尝试不同的 RNA 聚合酶进行转录；

②若模板GC含量高，采用 42℃进行转录反应，或者添加 SSB 提高产量及转录长度。

5. 转录产物电泳拖尾

电泳过程中有拖尾现象，可能原因：

①实验操作过程被RNase污染；

②DNA模板被RNase污染。

建议：

①实验过程中使用RNase-free的枪头和EP管，佩戴一次性乳胶手套和口罩，所有试剂均用RNase-free H₂O配制。

② 重新纯化模板 DNA。

 
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产品名称	货号	规格
UCF.ME® T7 RNA Polymerase GMP-grade（50U/μL）	10624ES90	5000 U
	10624ES97	50000 U
UCF.ME® T7 RNA Polymerase GMP-grade（250 U/μL）	10625ES10	10 KU
	10625ES60	100 KU