产品简介  

Nuclear Yeast Two-Hybrid Library Construction Kit是一款用于构建真核生物的全长核蛋白酵母双杂交文库的试剂盒，本试剂盒含有三个改造的PGADT7-S序列载体，分别命名为PGADT7-S1、PGADT7-S2、PGADT7-S3, 三个载体含有不同的读码框阅读方式，可以方便合成一份相同的双链cDNA构建三框文库。且改造的PGADT7-S序列载体多克隆上游含有NLS信号序列，可以把文库全部转录本基因定位到核内。本产品适用于起始模板为100 ng-100 μg不同来源真核生物总RNA样本。经过mRNA分离、单链cDNA合成、双链cDNA合成、双链cDNA分级纯化、小量连接转化确定分级取舍、大量连接转化。

操作流程

图1 核蛋白酵母双杂交文库构建试剂盒流程原理图

 

注意事项

1. 关于操作

1. 本产品仅作科研用途。
2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
3. 请于使用前将试剂盒各组分置于室温解冻。解冻后上下颠倒数次充分混匀，短暂离心后置于冰上待用。
4. 推荐在带热盖的PCR仪中进行各步骤反应，使用前应预热PCR仪至反应温度附近。
5. 请使用无RNase污染的耗材，并对实验区域定期进行清理，推荐使用固相RNA清除剂(翌圣货号: 10609ES)去除RNA酶污染。
6. PCR产物因操作不当极容易产生气溶胶污染，进而影响实验结果准确性。推荐将PCR反应体系配制区和PCR产物纯化检测区进行强制性的物理隔离；配备文库构建专用移液器等设备；定时对各实验区域进行清洁（固相RNA清除剂(翌圣货号: 10609ES)），以保证实验环境的洁净度。

2. 应用范围

1. 本产品仅作科研用途！
2. 本试剂盒适用于起始模板量为100 ng-75 μg（体积≤100 μL）的高质量动物、植物和真菌等真核生物的总RNA。如初始RNA浓度偏低，体积超过100 μL，可使用Hieff NGS® RNA Cleaner磁珠进行浓缩。 RNA需通过Agilent 2100 Bioanalyzer RNA 6000 Nano/Pico芯片检测，RIN值要求＞7，以保证mRNA有完整的poly(A)尾结构。
3. 本试剂盒的mRNA分离模块使用的是oligo (dT)磁珠，只有带poly(A)尾的mRNA才能被提取；其他不具poly(A)尾的RNA，如非编码RNA、无poly(A)尾的mRNA等不能适用本试剂盒。此外，FFPE样本中的mRNA降解严重，通常无完整的poly(A)尾结构，故亦无法使用本试剂盒进行建库。