随着医疗行业的蓬勃发展，类器官/干细胞培养的热度不断攀升，胃类器官也是类器官培养中比较受关注的一类。体外培养的胃类器官含有多种细胞克隆亚群，常衍生于胃干细胞或者多能诱导干细胞，其培养环境模拟体内的微环境，因此胃类器官在细胞组分、空间结构和生物功能等方面与胃上皮组织高度类似，为人类胃的生理与疾病的研究提供了一个有利的平台和工具。

胃类器官的培养较为繁琐，胃上皮腺体可分为胃底腺和胃窦腺两部分，均可用来构建胃上皮类器官。胃上皮类器官培养的原理就是3D条件下培养胃上皮干细胞，需要加入小分子化合物（如Gsatrin、Y-27632）和生长因子来刺激干细胞分裂、分化并形成球囊状结构。Gastrin I 则是胃类器官培养基中必须添加的小分子化合物，常用工作浓度为1-10 nM。下面总结了胃类器官培养的大致过程以及所需要的各种化合物、生化试剂和耗材等。

胃类器官培养所需的化合物、生化试剂、细胞因子、耗材等：

产品名称	货号
Gastrin I（human）	53007ES
Y-27632	53006ES
Y-27632 dihydrochloride	52604ES
A 83-01	53002ES
CHIR-99021	53003ES
SB 202190	53005ES
Nicotinamide 烟酰胺	51402ES
N-乙酰半胱氨酸	50303ES
B-27	60704ES
N-2	60706ES
HEPES（粉末）	60110ES
HEPES溶液（1 M），细胞培养级	60117ES
胎牛血清	40130ES
人FGF-10重组蛋白	91306ES
人EGF重组蛋白	92708ES
人wnt-3a重组蛋白	92276ES
人R-Spondin1重组蛋白	92278ES
人Noggin重组蛋白	92528ES
金属浴	80120ES
血清移液管（5mL）	84503ES
吸头（10uL）	83021ES
吸头（200uL）	83051ES
锥形离心管， 15mL，无菌	83505ES
锥形离心管， 50mL，无菌	83507ES
24孔板，无菌	84013ES
针头过滤器，0.22um，无菌	84309ES
Ceturegel^® Matrix for Organoid culture，Phenol Red-Free，LDEV-Free 基质胶	40191ES

培养方案

一. 胃类器官的复苏

1. 将储存有类器官的冻存管置于37度水浴中2-3分钟，让其快速解冻。

2. 将冻存管内的类器官转移至锥形管中，并加入适量胃类器官培养基。用血清移液管吹打2-3次，重悬类器官。

3. 500g离心3分钟，沉淀胃类器官，并弃去上清液。

4. 用低生长因子提取物重悬胃类器官，用血清移液管吹打2-3次，充分吹散均匀后加入到24孔板中，加入适量的重悬液。

5. 将24孔板放入细胞培养箱内，孵育约30分钟。

6. 制备胃类器官传代培养基。

制备培养基所需的化合物：

产品名称	货号	推荐浓度
Nicotinamide 烟酰胺	51402ES	10 mM
Y-27632 / Y-27632 dihydrochloride	53006ES / 52604ES	10 μM
CHIR-99021	53003ES	2-5 μM

7. 在每孔中加入适量胃类器官传代培养基。

8. 将含有胃类器官的培养板放到细胞培养箱内继续培养。

二. 胃类器官的培养

每2-3天对培养基进行更新，弃去废液，更换新鲜培养基，持续1-2周后，可进行传代。

三. 胃类器官的传代

1. 在显微镜下观察胃类器官的生长情况，24孔板中每孔可含有500-1000个类器官。

2. 将含有胃类器官的24孔板从细胞培养板转移至锥形瓶中。

3. 500g离心3分钟，沉淀胃类器官。从管的底部吸取培养基消化提取。

4. 用血清移液管轻轻吹打2-3次，将锥形瓶放入37度水浴中，孵育10-15分钟，消化提取物。

5. 锥形瓶中加入适量的FBS，终止消化。

6. 用血清移液管轻轻吹打2-3次后，对类器官进行过滤，分离。

7. 500g离心3分钟，沉淀胃类器官，弃上清。

8. 用培养基重悬类器官，并加入24孔板中，将培养板放入细胞培养箱内，孵育25-30分钟。

9. 在24孔板中加入适量的传代培养基，并置于细胞培养中继续培养。

图：多能干细胞分离的胚层成分可用于组织工程以生成复杂的人体胃类器官^[^1]

[1] Eicher A K , Kechele D O , Sundaram N , et al. Functional human gastrointestinal organoids can be engineered from three primary germ layers derived separately from pluripotent stem cells - ScienceDirect. 2021.