产品信息
产品名称 |
产品编号 |
规格 |
储存 |
价格(元) |
IgG MagBeads, Goat anti-Mouse 山羊抗小鼠IgG免疫磁珠 |
47502ES03 |
1 mL |
2-8℃保存 |
728.00 |
产品描述
免疫磁珠分离技术是以高均一性的磁性微球为固相支持物,将免疫配基通过功能基团结合到磁性载体上形成的免疫磁性微球,利用免疫学反应的高度特异性与磁珠特有的磁响应性,实现特异性靶物质分离的技术,具有特异性强、灵敏度高、效率高、操作简单等特点。
应用羊抗鼠(Goat anti-Mouse)IgG免疫磁珠可根据实验需要选择各种小鼠单抗实现细胞分离。通常使用以下两种分离方式:阳性分离或阴性分离。阳性分离是直接从细胞混合液中分离靶细胞,阴性分离是利用免疫磁珠去除无关细胞,收集游离于磁场中的靶细胞。
羊抗鼠(Goat anti-Mouse)IgG免疫磁珠可通过直接法或间接法实现细胞分选。直接法是将抗特异细胞表面抗原的Mouse IgG与免疫磁珠表面的羊抗鼠IgG结合,将磁珠结合的细胞与其它细胞分开,达到细胞分选的目的。间接法是先将抗特异细胞表面抗原的Mouse IgG与混合体系中靶细胞表面特异抗原结合,再与羊抗鼠(Goat anti-Mouse)IgG免疫磁珠结合达到细胞分选的目的。
产品性质
磁珠含量(Beads Concentration) |
6 mg/mL |
平均粒径(Mean Diameter) |
1.0±5% µm |
结合能力(Binding Capacity) |
0.20 mg Ms IgG/mg |
运输和保存方法
冰袋运输。2-8℃保存。有效期6个月。
注意事项
1)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
2)请勿冻存、干燥、加热或离心操作,这些操作会导致磁珠聚集而降低结合能力。
3)产品使用前需剧烈振荡或超声处理,避免磁珠沉降聚集。
4)磁珠分选缓冲液,推荐使用 PBS,0.5% BSA,2 mM EDTA,0.09%NaN3,pH7.4。
5)Fc受体(FcR)封闭:在某些实验中,部分抗体会通过其Fc段与不同细胞表面的FcR结合,出现非特异性反应。此时可预先将细胞与IgG或针对FcR的特异性抗体室温孵育5-10 min,一般107细胞中可加入1-10 µg IgG或FcR的特异性抗体进行封闭;反应体系中也可加入5-10%蛋白降低非特异性反应,但蛋白浓度太高会降低分选效率。
6)实验前应对抗体使用浓度,磁珠与细胞反应比例,反应时间等参数优化以达到最佳的细胞分选效果。
7)如果分选的细胞进一步用作细胞培养实验,全过程注意无菌操作,分选缓冲液中可不加防腐剂NaN3,磁珠保存液中的防腐剂可用适量无菌缓冲液或细胞培养基洗2次以去除。
8)本产品仅作科研用途!
使用方法
以下为常规操作方式,建议根据具体实验,优化实验方法。
1)从抗凝血中提取外周血单个核细胞(PBMC),用PBS,5% BSA,0.09% NaN3,pH7.4洗3次,40-70 µm尼龙网过滤去除细胞团块和碎片,调整细胞数为1×108 /mL。
2)加入适量Mouse IgG,一般1×107 PBMC中加入0.1-20 µg抗体,室温反应30 min。
3)1000 rpm离心5 min,弃上清。加入1 mL磁珠分选缓冲液重悬细胞,1000 rpm离心5 min,弃上清,洗2次(2×1 mL)。
4)1 mL磁珠分选缓冲液重悬细胞,加入50 µL免疫磁珠,室温反应30 min,间隔10 min轻晃反应管,避免磁珠沉淀,使磁珠与细胞充分反应,尽量防止出现气泡。阴性分选采用步骤5-7,阳性分选采用步骤8-9。
阴性分选步骤
5)应用磁分离器分离5-8 min,收集未被免疫磁珠结合的细胞悬液至另一干净管中。
6)加入1 mL磁珠分选缓冲液重悬磁珠,用玻璃滴管或移液枪枪头反复吹打磁珠。
7)重复步骤5,合并两次收集的细胞悬液,可将细胞悬液再次置于磁分离器中分离5-8 min,可明显增加靶细胞纯度。
阳性分选步骤
8)应用磁分离器分离5-8 min,去除未与磁珠结合的细胞。
9)结合了靶细胞的免疫磁珠用1 mL磁珠分选缓冲液洗5次(5×1 mL)后,可直接进行流式检测,或置于37℃培养48 hrs可使细胞与磁珠分离。
HB180108