产品描述

 

天然蛋白G（Protein G）是一种分离自G型或C型链球菌属的细胞表面蛋白，与发现于金黄色葡萄球菌的细胞壁表面的蛋白A类似，主要通过与免疫球蛋白（Ig）的Fc区相互作用，结合大多数哺乳动物的IgG，可用于多种抗体（单抗和多抗）的分离纯化。在与不用的免疫球蛋白亚类的结合特性上，ProteinA 和Protein G结合性能不太一样，相比ProteinA，   ProteinG 对牛、羊、马等多克隆抗体有更强的结合力，它还可以结合不能与ProteinA很好结合的大鼠lgG、人lgG3和小鼠lgG1（详见附录1）。

本品使用的是基因改造后的蛋白G，不仅维持其本身的Ig亲和特性，同时也去除了天然蛋白本身的非主要结合域以降低非特异性结合，rProtein G Agarose Resin 4FF以高度交联的琼脂糖凝胶为基质，重组Protein G为配基，具有很高的物理化学稳定性，可以在相对较高的流速下进行抗体的纯化，适用于工业客户。利用本品经过一步亲和层析，即可从腹水、血清和培养液等样品中得到高纯度的抗体，使用方便，应用广泛。

 

产品性质

 

基质（Matrix）	高度交联的4%琼脂糖微球
配体（Ligand）	重组蛋白G
孔径（Bead size）	45-165 µm
最大流速（Flowmax）	0.3 MPa,3 bar
储存缓冲液（Buffer）	含20%乙醇的1×PBS
载量（Capacity）	＞30 mg human IgG/ mL 基质
pH范围（pH range）	3-10

 

运输与保存方法

 

冰袋运输。2-8℃保存，2年有效。

需准备试剂

【注】建议以下缓冲液在使用前用0.22 μm或0.45 μm滤膜过滤。

结合/洗杂缓冲液：0.15 M NaCl, 20mM Na₂HPO₄, pH7.0

洗脱缓冲液：0.1 M甘氨酸，pH 3.0

中和液：1 M Tris-HCl，pH 8.5

 

使用方法

 

【注】上柱之前要确保样品溶液有合适的离子强度和pH值，可以用结合/洗涤缓冲液对血清样品、腹水或细胞培养液稀释，或者样品用结合/洗涤缓冲液透析。

1 rProtein G Agarose Resin 4FF的装填

1）用去离子水冲洗层析柱底筛板与接头，确保柱底筛板上无气泡，关闭柱底出口，并在柱底部留出1-2 cm的去离子水。

2）将树脂悬浮起来，小心的将浆液连续地倒入层析柱中。用玻璃棒沿着柱壁倒入浆液可减少气泡的产生。

3）如果使用储液器，应立即在层析柱和储液器中加满水，将进样分配器放置于浆液表面，连接至泵上，避免在分配器或进样管中产生气泡。

4）打开层析柱底部出口，开起泵，使其在设定的流速下进行。最初应让缓冲液缓慢流过层析柱，然后缓慢增加至最终流速， 这样可避免液压对所形成柱床的冲击，避免柱床形成的不均匀。如果达不到推荐的压力或流速，可以用所使用泵的最大流速，这样也可以得到一个很好的装填效果。

【注】在随后的色谱程序中，不要超过最大装柱流速的75%，当柱床高度稳定后，在最后的装柱流速下至少再上3倍柱床体积的去离子水。标上柱床高度。

5）关闭泵，关闭层析柱出口。

6）如果使用储液器，去除储液器，将分配器至于层析柱中。

7）将分配器推向柱子至标记的柱床高度处。允许装柱液进入分配器，锁紧分配器接头。

8）将装填好的层析柱连接至泵或色谱系统中，开始平衡。如果需要可以重新调整分配器。

2 样品纯化

1）平衡：用5倍柱体积的结合Buffer平衡层析柱，使填料处于与目的蛋白相同的缓冲体系下，起到保护蛋白的作用。

2）上样：将样品加到平衡好的Protein G Agarose Resin 4FF中，保证目的蛋白与树脂充分接触，提高目的蛋白的回收率，收集流出液，待检测。

3）洗杂： 用10-15倍柱体积的洗杂Buffer进行清洗，去除非特异性吸附的杂蛋白，收集洗杂液。

4）洗脱： 使用 5-10 倍柱体积的洗脱Buffer，收集洗脱液，即目的蛋白组分。

5）清洗及保存：依次使用3倍柱体积的结合Buffer和5倍柱体积的去离子水平衡填料，最后再用5倍柱体积的 20%的乙醇平衡，然后保存在等体积的20%的乙醇中，置于4度保存，防止填料被细菌污染。

3 SDS-PAGE检测

将纯化过程中得到的样品（包括原始样品、流出组分、洗杂及洗脱组分等）利用SDS-PAGE进行检测，判定其纯化效果。

4 树脂清洗

随着一些变性物质的沉淀和蛋白的聚集，往往造成流速和结合载量下降，影响柱子的性能，这时需对柱子进行清洗：

1）去除沉淀或变性物质

① 用2倍柱体积的6M 盐酸胍溶液进行清洗；

② 用5倍柱体积的PBS，pH 7.4 清洗。

2）去除由于疏水性吸附造成的非特异吸附物质

① 用3-4倍柱体积的70%乙醇或2倍柱体积的1% Triton™X-100清洗；

② 用5倍柱体积的PBS, pH 7.4 清洗。

 

注意事项

 

1.请勿冷冻保存本产品。

2.Protein G琼脂糖珠使用前一定要充分颠倒若干次，使琼脂糖珠混合均匀。

3.所有操作过程中，样本需要在4℃或冰上操作。

4.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

5.本产品仅作科研用途！

 

附录1. 蛋白A，G对不同物种Ig的结合能力总表

免疫球蛋白亚型	Protein A	Protein G	免疫球蛋白亚型	Protein A	Protein G
Human IgG	++++	++++	Mouse IgG	++++	++++
Human IgG1	++++	++++	Mouse IgG1	+	++++
Human IgG2	++++	++++	Mouse IgG2a	++++	++++
Human IgG3	+	++++	Mouse IgG2b	+++	+++
Human IgG4	++++	++++	Mouse IgG3	++	+++
Human IgM	Use anti-Human IgM		Mouse IgM	Use anti-Mouse IgM
Human IgE	NR	NR	Chicken IgG (IgY)	NR	NR
Human IgA	+	NR	Cow IgG	++	++++
Human IgA1	+	NR	Goat IgG	+	++++
Human IgA2	+	NR	Goat IgG1	+	++++
Human IgD	Use anti-Human IgD		Goat IgG2	++++	++++
Rat IgG	+	++	Goat IgM	NR	NR
Rat IgG1	NR	+	Guinea Pig IgG	++++	++
Rat IgG2a	NR	++++	Guinea Pig IgG1	++++	++
Rat IgG2b	NR	+	Guinea Pig IgG2	++++	++
Rat IgG3	+	++	Hamster IgG	+	++
Sheep IgG	+	++	Horse IgG	+	++++
Sheep IgG1	+	++	Rabbit IgG	++++	+++
Sheep IgG2	+	++	Rabbit IgM	NR	NR
Sheep IgM	NR	NR	Rabbit All isotypes	+++	++
Pig IgG	+++	+++	Monkey IgG	++++	++++
Cat IgG	++++	+	Donkey IgG	++	++++
Dog IgG	++++	+
(+)= weak binding; (++)= moderate binding; (++++)= strong binding; NR= not recommended; (-)= not tested;