Hieff® Taq DNA Ligase是一种突变型的Taq DNA连接酶,具有较高的连接效率,应用于同源重组性能较野生型得到显著提高。同时维持了野生型的基本功能,是一种耐高温连接酶,它能催化与同一互补靶DNA链杂交的两条相邻寡核苷酸链的5´-磷酸和3´-羟基之间形成磷酸二酯键。该催化反应只有当两条寡核苷酸链与互补靶 DNA 完全配对,且两条寡核苷酸链之间没有间隙的条件下才会发生,因此,可以用它来检测单碱基替换。Taq DNA连接酶以NAD+为辅酶因子,在45℃-65℃范围内均有活性。
产品组分
组分编号 |
组分名称 |
产品编号/规格 |
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14958ES03 (1 mL) |
14958ES08 (5 mL) |
14958ES50 (50 mL) |
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14958 |
Hieff® Taq DNA ligase (800 U/µL) |
1 mL |
5 mL |
50 mL |
来源
重组E. coli 菌株,含有从Thermus aquaticus HB8中克隆的连接酶基因。
产品应用
1)同源重组;
2)用连接酶检测反应和连接酶链式反应对等位基因进行特异性检测;
3)通过PCR扩增掺入磷酸化寡核苷酸进行诱变。
单位定义
在50 μL反应体系中,45℃条件下,孵育15 min能使50%的1 μg经BstEII消化的λDNA片段(12 bp粘性末端)发生连接所需要的酶量定义为1个活性单位(U)。
运输与保存方法
干冰运输。-20℃保存,有效期2年。长时间(大于30天)保存时,缓冲液应于-80℃保存。
注意事项
1. 10×Taq DNA Ligase Reaction Buffer中含有辅酶因子NAD+,为了延长NAD+的半衰期,Buffer应于-80℃储存;
2. Taq DNA Ligase不能替代T4 DNA ligase;
3. 本产品仅做科研用途;
4. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用方法
组分 |
用量 |
DNA |
up to 1 µg |
10×Taq DNA Ligase Reaction Buffer (Cat#15823) |
5 μL |
Taq DNA Ligase (800 U/µL) |
80 U |
ddH2O |
up to 50 μL |
2. 反应条件:45℃温育15 min。加入终止染液(50%甘油,50 mM EDTA和溴酚兰)终止反应。
HB221128