产品说明书
FAQ
COA
已发表文献
Hifair® V Universal Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit (UDG Plus)是以RNA为模板进行多重定量PCR反应的试剂盒。在实验的过程中，逆转录和定量PCR在同一反应管中进行，简化了实验操作，降低了污染的风险。
本试剂盒利用耐热Hifair® V Reverse Transcriptase高效合成第一链cDNA，并利用UNICON® HotStart Taq DNA Polymerase进行定量扩增。本试剂盒主要包含优化的 MP Buffer，Enzymes Mix 等，缓冲液中已含有Mg2+和 dNTP , 有效抑制非特异性PCR扩增的因子和提升多重qPCR反应扩增效率的因子，能够在保证引物扩增效率的同时，进行多重扩增反应。并添加了dUTP/UDG 系统，可有效防止气溶胶污染的风险。
产品组分
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组分编号 |
组分名称 |
产品编号/规格 |
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13894ES60 (100 T) |
13894ES80 (1000 T) |
13894ES92 (10000 T) |
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13894-A |
5×Hifair® V Universal MP Buffer |
600 μL |
6 mL |
60 mL |
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13894-B |
Hifair® V Universal Enzyme Mix |
120 μL |
1.2 mL |
12 mL |
【注】
a. 5×Hifair® V Universal MP Buffer 为Hifair® V Universal Multiplex One Step RT-qPCR Probe Buffer 的简写。
b. Hifair® V Universal Enzyme Mix 主要包含有耐热Hifair® V Reverse Transcriptase、UNICON® HotStart Taq DNA Polymerase和UDGase。
适用机型
Applied Biosystems: 5700, 7000, 7300, 7700, 7900HT Fast, StepOne™, StepOne Plus™, 7500, 7500 Fast, ViiA™7, QuantStudio™ 3 and 5, QuantStudio™ 6,7,12k Flex;
Bio-Rad: CFX96, CFX384, iCycler iQ, iQ5, MyiQ, MiniOpticon, Opticon, Opticon 2, Chromo4;
Eppendorf: Mastercycler ep realplex, realplex 2 s;
Qiagen: Corbett Rotor-Gene Q, Rotor-Gene 3000, Rotor-Gene 6000;
Roche Applied Science: LightCycler 480, LightCycler 2.0; Lightcycler 96;
Stratagene: MX3000P™, MX3005P™, MX4000P™;
Thermo Scientific: PikoReal Cycler; Cepheid: SmartCycler; Illumina: Eco qPCR.
运输和保存方法
冰袋运输。-20°C储存，有效期12个月。本品避免反复冻融。建议分装保存。
反应体系
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组分 |
体积（μL） |
终浓度 |
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5×Hifair® V Universal MP Buffer |
6 |
1x |
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Hifair® V Universal Enzyme Mix |
1.2 |
- |
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Primer/Probe Mixa |
x |
- |
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模板RNAb |
1-5 |
- |
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RNase Free H2O |
to 30 |
- |
【注】：使用前务必充分混匀，避免剧烈震荡产生过多气泡。请于超净工作台内配制，并使用无核酸酶残留的枪头、反应管；推荐使用带滤芯的枪
头。避免交叉污染和气溶胶污染。
a. 引物探针混合液浓度：Primer/Probe Mix 中包含多对引物和探针，通常每条引物终浓度可以根据情况在 0.1-1.0 μM 间进行调整；探针终浓度也可以根据对荧光曲线和荧光增峰的要求在 0.05-0.5 μM范围内进行调整。
b. 模板稀释：qPCR灵敏度极高，建议将模板进行稀释使用，控制Ct值在20-35之间适宜。
扩增程序
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循环步骤 |
温度 |
时间 |
循环数 |
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逆转录 |
50℃ |
10 min |
1 |
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预变性 |
95℃ |
5 min |
1 |
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扩增反应 |
95℃ |
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40-45 |
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60℃a |
30 secb |
【注】：退火/延伸温度可根据实验要求适当调整。
a. 扩增反应：扩增反应温度根据设计的引物Tm值进行调整。
b. 荧光信号采集：不同的qPCR检测仪器所需的荧光信号采集时间不同，请根据最短时间限制进行设置。
注意事项
1. 实验过程中请使用RNase free耗材。
2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
HB220729
