产品简介

Hieff Canace® Uracil+ High-Fidelity DNA polymerase是一种基于Pfu DNA Polymerase改造而成的新一代高保真DNA聚合酶，和Pfu DNA Polymerase相比，Hieff Canace® Uracil+ High-Fidelity DNA polymerase的性能得到大幅度提升，针对复杂的模板也能快速准确的完成PCR反应。其保真性显著提高，且解决了常规高保真酶无法以dUTP为原料进行聚合反应、无法使用含有dUTP的扩增引物以及无法使用含有dUTP的DNA作为扩增模板等诸多问题。本产品具有极强的扩增效率和广泛的模板适应性，适合复杂模板的扩增。

 

产品信息

货号	14384ES03 / 14384ES08 / 14384ES50
规格	3 KU / 15 KU / 150 KU
浓度	3 U/µL

 

组分信息

组分编号	组分名称	14384ES03	14384ES08	14384ES50
14384-A	Hieff Canace® Uracil+ High-Fidelity DNA polymerase (3 U/μL)	1 mL	5 mL	50 mL

 

产品应用

1.使用含dUTP的引物进行高保真文库扩增；

2.使用含dUTP的模板进行高保真文库扩增；

3.使用含dUTP的dNTP进行高保真文库扩增。

 

储存条件

-25~-15℃保存，有效期1年。

 

使用说明

Hieff Canace® Uracil+ High-Fidelity DNA polymerase与常规高保真酶的使用方法略有不同。在使用前，请务必仔细阅读使用说明。

1.所有操作应于冰上进行，2×Canace® Uracil+ PCR buffer解冻后请充分混匀。体系配置之前请预热PCR仪，各组分添加完成之后用移液器吸打充分混匀并短暂离心至管底，然后置于预热的PCR仪中进行反应。所有组份使用完毕之后及时放回-20℃保存。

 

 

 

1）推荐配置应用反应与体系：

组分	体积
模板DNA*	X µL
2×Canace® Uracil+ PCR buffer (含Mg2+，dNTPs)	25 µL
正向引物 (10~25 μM）	1~2.5 µL
反向引物 (10~25 μM）	1~2.5 µL
Hieff Canace® Uracil+ High-Fidelity DNA polymerase (3 U/μL)**	0.34 µL
ddH2O	Total to 50 µL

*：使用纯化后的高质量DNA模板可以显著提高扩增效率和成功率。

**：在50 μL体系中，推荐使用1 U 本品，可以在0.5-2 U之间进行优化，请勿超过2 U。此外，为了防止本品因3’→5’外切酶活性降解引物，建议将聚合酶在最后一步加到反应体系中。

2）反应体系中dNTPs使用终浓度为200 μM，如特殊情况下需要制备含dUTP的模板，可自行额外添加dUTP至终浓度为400 μM。反应体系中Mg2+终浓度2 mM，可供参考。

2.推荐反应程序

温度	时间	循环数
98°C	1 min*	1
98°C	10 sec	1~15（根据实验要求）
60°C**	30 sec
72°C***	30 sec
72°C	5 min	1
4°C	Hold	-

*：预变性温度推荐使用98°C。预变性推荐时间：质粒DNA等简单模板为30 sec；文库为1 min；cDNA、基因组DNA等复杂模板为3 min；高GC含量模板为5-10 min。

**：退火温度推荐使用60°C，也可根据需要，设立温度梯度去摸索引物退火的最适温度。推荐退火时间为20 sec，可以在10-30 sec内调节。退火时间太长可能导致扩增产物在胶上呈弥散状。

***：延伸温度和时间：推荐使用72°C，延伸时间根据实际需要进行调整。

 

注意事项  

1.为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

2.本产品仅作科研用途。

 

Ver.CN20240415