Hieff Canace^®II High-Fidelity DNA Polymerase是新一代的高保真DNA聚合酶。该酶基于Pyrococcus Furiosis DNA Polymerase，经基因工程改造而成，其蛋白结构包含5’→3’聚合酶结构域和3’→5’外切酶结构域。这种组合大幅度提升了酶的耐热性，保真性。耐热温度达到98°C，保真性是Taq DNA聚合酶的52倍，普通Pfu DNA聚合酶的6倍。该酶主要为NGS文库扩增所设计，克服了扩增不同GC含量模板带来的GC-bias，同时扩增效率比第一代的Canace高1.5倍，文库扩增产量大幅增加。本产品配备了单独的buffer，并增加了特殊的扩增促进剂，具有极高的扩增效率和广泛的模板适应性。

 

产品组分

组分编号	组分名称	产品编号/规格
		14381ES03	14381ES10	14381ES60
14381	Hieff Canace®II High-Fidelity DNA Polymerase (10 U/μL)	1 mL	10 mL	100 mL

 

产品应用

基因克隆；复杂DNA模板扩增；高通量建库。

 

活性定义

用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物，74°C，30 min内，摄入10 nmol的全核苷酸为酸性不溶物的活性定义为1个活性单位（U）。

 

运输与保存方法

冰袋运输。-20°C保存，有效期2年。

 

注意事项

1. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

2. 本产品仅作科研用途！

 

使用方法

在使用前，请务必仔细阅读使用说明。

1. PCR反应体系（推荐冰上配制）

表1 PCR扩增反应体系

组分	体积 (μL)
ddH2O	to 50
2×Canace®Ⅱ PCR buffer (含Mg2+, dNTPs)(Cat#15421)	25
模板或接头连接产物	X
NGS Primer 1 (10-25 μM)	1
NGS Primer 2 (10-25 μM)	1
Hieff Canace®Ⅱ High-Fidelity DNA Polymerase (10 U/μL)	0.1

【注】： 1) 试剂使用：使用前要充分解冻混匀；

2) 聚合酶浓度：50 μL体系推荐使用1 U，可以在0.5-2 U之间进行优化；

3) Mg²⁺终浓度：体系终浓度为1.5 mM。如有特殊需要，可用50 mM MgCl₂，以0.2-0.5 mM为间隔向上摸索；

4) 高GC模板：在体系中加入终浓度为3%的DMSO可能有利于扩增。

2. PCR扩增程序

表2 PCR扩增反应程序

温度	时间	循环数
98℃	1 min	1
98℃	10 sec	1~15（根据实验要求）
60℃	30 sec
72℃	30 sec
72℃	5 min	1
4℃	Hold	-

 

HB221220