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产品描述
Hieff Canace® High-Fidelity DNA Polymerase是新一代的高保真DNA聚合酶。该酶基于Pyrococcus Furiosis DNA Polymerase，经基因工程改造而成。其蛋白结构包含5’→3’聚合酶结构域和经过改造的3’→5’外切酶结构域。这种组合大幅度提升了酶的耐热性，保真性。耐热温度达到98℃，保真性是Taq DNA聚合酶的52倍，普通Pfu DNA聚合酶的6倍。酶溶液中添加了独特的延伸因子，扩增速度达到15 sec/kb。本产品配备了优化后的酶缓冲液，添加了PCR增强组分，使得该酶具有极强的扩增效率和广泛的模板适应性，非常适合复杂模板的扩增。扩增产物为平末端。
产品组分
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编号 |
组分 |
产品编码/规格 |
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10135ES10 （10 U） |
10135ES60 （100 U） |
10135ES76 （500 U） |
10135ES80 （1000 U） |
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10135-A |
Hieff Canace® High-Fidelity DNA Polymerase（2 U/μL） |
5 μL |
50 μL |
250 μL |
2×250 μL |
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10135-B |
2×Canace® PCR buffer (含Mg2+，dNTPs) |
300 μL |
3×1 mL |
15×1 mL |
30×1 mL |
产品应用
基因克隆；复杂DNA模板扩增；高通量建库。
活性定义
用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物，74℃，30 min内，摄入10 nmol的全核苷酸为酸性不溶物的活性定义为1个活性单位（U）。
质量控制
核酸外切酶残留检测：10 U本品和0.5 μg λDNA-Hind Ⅲ，37℃下孵育4 h，DNA的电泳谱带无变化。
切口酶残留检测：10 U本品和0.5 μg IL23R质粒，37℃下孵育4 h，DNA的电泳谱带无变化。
运输和保存方法
冰袋运输。-20℃保存。有效期2年。
注意事项
1）为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
2）本产品仅作科研用途！
PCR反应体系（推荐冰上配制）
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组分 |
体积 |
终浓度 |
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H2O |
to 50 μL |
- |
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2×Canace® PCR buffer (含Mg2+，dNTPs) |
25 μL |
1× |
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DNA模板 |
适量 |
- |
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Primer正向 (10 μM) |
2.5 μL |
0.5 μM |
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Primer反向 (10 μM) |
2.5 μL |
0.5 μM |
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Hieff Canace® High-Fidelity DNA Polymerase (2 U/μL) |
0.5 μL |
1 U/50 μL |
【注】：
1）试剂使用：使用前要充分解冻混匀。
2）聚合酶浓度：推荐使用1 U/50 μL。可以在0.5-2 U/50 μL之间进行优化，请勿超过2 U/50 μL。
3）聚合酶添加：为了防止聚合酶因3’→5’外切酶活性降解引物，建议将聚合酶在最后一步加到反应体系中。
4）Mg2+终浓度：体系终浓度为1.5 mM。如有特殊需要，可用50 mM MgCl2，以0.2-0.5 mM为间隔向上摸索。
5）高GC模板：在体系中加入终浓度为3%的DMSO可能有利于扩增。
6）不同模板的推荐使用量（50 μL反应体系）：
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模板种类 |
扩增片段1 kb-20 kb |
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基因组DNA |
50 ng-200 ng |
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质粒或病毒DNA |
10 pg-20 ng |
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cDNA |
1-5 μL (不超过PCR反应总体积的1/10) |
PCR扩增程序
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循环步骤 |
温度 |
时间 |
循环数 |
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预变性 |
98℃ |
0.5-3 min |
1 |
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变性 |
98℃ |
10 sec |
30-35 |
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退火 |
60℃ |
20 sec |
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延伸 |
72℃ |
15-30 sec/kb |
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终延伸 |
72℃ |
5 min |
1 |
【注】：
1）预变性温度和时间：推荐使用98℃。预变性推荐时间：质粒DNA等简单模板为30 sec；cDNA、基因组DNA等复杂模板为3 min；高GC含量模板为5-10 min。
2）退火温度和时间：推荐使用60℃，也可根据需要，设立温度梯度去摸索引物退火的最适温度。推荐退火时间设置为20 sec，可以在10-30 sec内调节。退火时间太长可能导致扩增产物在胶上呈弥散状。
3）延伸温度和时间：推荐使用72℃。延伸时间推荐如下：质粒DNA等简单模板为15 sec/kb；cDNA、基因组DNA等复杂模板为30 sec/kb，根据实际情况可延长至40 sec/kb。
4）扩增产物：请将PCR扩增产物放置于-20℃保存，防止该酶降解扩增产物。扩增产物为平末端，产物直接用于克隆，请使用平末端连接载体。
应用实例
图1： Hieff Canace® 高保真DNA聚合酶扩增2.1 kb-6 kb目的片段。所有基因片段均可实现高特异性、高产量扩增。模板：拟南芥基因组DNA，50 ng/50 μL；退火温度：60℃；延伸时间：30 sec/kb。M：1 kb ladder；1：2.1 kb；2：3.1 kb；3：4.2 kb；4：5 kb；5：6 kb。
相关产品
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产品名称 |
货号 |
规格 |
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10136ES03/08/25 |
1/5/25 mL |
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10907ES20 |
20 T |
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10908ES20 |
20 T |
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10909ES20 |
20 T |
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10910ES20 |
20 T |
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10911ES25/62 |
25/5×25 T |
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10912ES10/50 |
10/5×10 T |
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11003ES10 |
10 T |
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11004ES10 |
10 T |
HB210923
