产品描述

 

MolPure^® Magnetic Swab Viral DNA/RNA Kit可快速、高效地从拭子及病毒培养上清液中分离纯化高纯度的病毒DNA或RNA。采用独特的磁珠及精心优化的缓冲体系有效捕获释放的核酸，提取的病毒DNA或RNA纯度高，质量稳定可靠，适用于各种下游应用实验，如PCR、荧光定量PCR等实验。

 

产品组分

 

组分编号	组分名称	18300ES50（50T）	18300ES60（100T）	18300ES70（200T）
18300-A	裂解缓冲液*	10 mL	20 mL	40 mL
18300-B	漂洗液*	15 mL	30 mL	60 mL
18300-C	洗涤液*	12 mL	24 mL	48 mL
18300-D	洗脱液	5 mL	10 mL	20 mL
18300-E	磁珠悬浮液	1 mL	2 × 1 mL	4× 1 mL
18300-F	Carrier RNA（来源于酵母）	310 µg	2× 310 µg	4× 310 µg
18300-G	RNase free H2O	0.5 mL	1 mL	2 mL

【注】：18300ES50裂解缓冲液*需加11 mL异丙醇，漂洗液*需加10.7 mL异丙醇，洗涤液*需加48 mL无水乙醇。

18300ES60裂解缓冲液*需加22 mL异丙醇，漂洗液*需加21.4 mL异丙醇，洗涤液*需加96 mL无水乙醇。

18300ES70裂解缓冲液*需加44 mL异丙醇，漂洗液*需加42.8 mL异丙醇，洗涤液*需加192 mL无水乙醇。

 

运输与保存方法

 

室温运输，室温保存，有效期12个月。

 

注意事项

 

注意观察各溶液是否有析出或浑浊（尤其冬季等室温为低温环境时），避免影响使用效果。

使用前按照标签注明的体积加入相应的异丙醇或无水乙醇。

3. 首次使用前，Carrier RNA（18300-F）先加入310 µL的RNase free H2O（18300-G）配制成1 µg/µL；可以根据用量情况进行分装，放置-20℃保存，避免Carrier RNA反复冻融，-20℃保存，有效期12个月。

4. 冻存样本避免反复冻融，否则会导致样本中DNA和RNA的质量下降。

5. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

 

实验前准备

 

自备设备和试剂：磁性分离架或自动化提取仪，水浴锅或金属浴，涡旋混匀仪，离心机，1.5 mL离心管等。

 

操作步骤

 

 

一、手工提取操作方法

1. 鼻拭子/咽拭子样本处理方式：采集样本，并与生理盐水或病毒拭子保存液彻底颠倒或涡旋振荡混匀；取200 µL液体转移至1.5 mL无核酸酶离心管中。

注：不足200 µL时，需用拭子保存液或生理盐水补足。

2. 加入400 µL裂解缓冲液*（确认已加入异丙醇），6 µL Carrier RNA溶液，立即充分摇匀。

注：可根据样本数量，在总共需要的裂解结合液中加入总共需要的Carrier RNA混匀备用，混合后每个样本加入400 µL混合液，混合液可在4℃ 保存1小时，建议现用现配。

3. 加入20 µL磁珠悬浮液。

注：磁珠使用前需在涡旋混匀仪上充分重悬或充分颠倒混匀，在一次性加样4-5次后，建议再次混匀后加样。

4. 室温（15-25℃）放置10 min，每隔2-3 min摇晃混匀1次。短暂离心收集管盖与管壁的液体。

5. 将离心管放置于磁力架上静置，磁珠完全吸附后，小心吸弃液体。

6. 向离心管中加入500 µL漂洗液*（确认已加入异丙醇），摇匀后涡旋振荡1 min。短暂离心收集管盖与管壁的液体。

7. 将离心管放回磁力架上静置，磁珠完全吸附后，小心吸弃液体。

8. 向离心管中加入500 µL洗涤液*（确认已加入乙醇），摇匀后涡旋振荡1 min。短暂离心收集管盖与管壁的液体。

9. 将离心管放回磁力架上静置，磁珠完全吸附后，小心吸弃液体。

10. 重复一遍步骤8和9。

11. 将离心管放置在磁力架上，开盖56℃晾干3-5 min，以除去残留的乙醇。

注：需确保乙醇挥发完全，但磁珠也不能过度干燥，干燥至磁珠刚出现龟裂即可。

12. 从磁力架上取下离心管，向离心管中加入50-100 µL洗脱液（推荐50 µL），振荡混匀使磁珠分散，56℃放置2 min。短暂离心收集管盖与管壁的液体。

13. 将离心管放回磁力架上静置，磁珠完全吸附后，小心将液体转移至新的无核酸酶的离心管中。

14. 溶液可置于-20℃短期保存，-80℃长期保存。

二、自动化提取操作方法

配套自动化仪器使用，以奥盛32 通道核酸提取仪器为例。

1. 按照下表向96孔深孔板中加入相应试剂（样本需平衡至室温）：

列的名称	位置	试剂名称	用量/孔
样品处理列	1/7列	样本	200 µL
		裂解缓冲液*	400 µL
		Carrier RNA溶液	6 µL
漂洗列	2/8列	漂洗液*	500 µL
洗涤+磁珠列	3/9列	洗涤液*+磁珠悬浮液	500 µL+20 µL
洗涤列	4/10列	洗涤液*	500 µL
洗脱列	6/12列	洗脱液	70 µL

注：1）磁珠悬浮液使用前需在涡旋混匀仪上充分重悬或充分颠倒混匀，在一次性加样4-5次后，建议再次混匀后加样。

2）可以根据样本数量，在总共需要的裂解缓冲液中加入总共需要的Carrier RNA混匀备用，混合液在4℃ 1 h内稳定。

2. 按照提取仪的位置，正确安放96孔板及磁棒套。

3. 按以下程序进行自动化提取实验。

4．自动化程序结束后，将第6、12列洗脱液转移至干净的无核酸酶离心管中，溶液可置于-20℃短期保存，-80℃长期保存。

奥盛32通道核酸提取仪器的提取程序

步骤	孔位	混合时间(min)	吸磁时间(sec)	等待时间(min)	容积(μL)	混合速度(1-10)	温度(℃)	混合位置(0-100%)	混合幅度(1-100%)	吸磁位置(0-100%)	吸磁速度(1-10)
取磁珠	3	0.3	70	0	500	7	/	0	80	0	1
裂解结合	1	3	60	0	600	5	/	0	80	0	1
清洗1	2	1	40	0	500	7	/	0	80	0	1
清洗2	3	1	40	0	500	5	/	0	80	0	1
清洗3	4	1	40	1.5	500	5	/	0	80	0	1
洗脱	6	1.5	70	0	70	6	56	0	80	0	1
弃磁珠	3	0.3	0	0	500	7	/	0	80	0	1

注：“选项”中选择“升温动作同步”，磁吸方式选择“分9段磁吸”。

 

HB20220224