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产品描述
本产品是大肠杆菌重组表达来源的噬菌体T7 RNA聚合酶，以含有T7启动子序列（5’-TAATACGACT CACTATAG*-3’）的双链DNA为模板，以NTP为底物，合成与启动子下游的反向单链DNA互补的RNA。双链线性平末端或5’突出末端DNA均可作为T7 RNA聚合酶的底物模板，因此线性质粒、PCR产物均可用作体外合成RNA的模板。
注：G*为RNA转录的第一个碱基。
本品是按照GMP工艺要求生产，产品以无菌液体形式提供。
产品性质
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来源（Source） |
重组E. coli |
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最适温度（Optimum Temperature） |
37℃ |
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宿主核酸残留（Host nucleic acid residue） |
<10 fg/U |
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宿主蛋白残留（Host protein residue） |
<50 ppm |
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病原体（HBV/ HCV/HIV）检测 |
无检出 |
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RNA酶残留（RNase residue） |
阴性 |
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内毒素残留（Endotoxin residue） |
<0.05EU/1000U |
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支原体检测（Mycoplasma detection） |
无检出 |
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无菌检测（Sterility testing） |
无检出 |
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储存缓冲液（Storage Buffer） |
50 mM Tris-HCl, 1 mM EDTA, 10 mM DTT, 100 mM NaCl, 0.1% Triton X-100，50%（v/v）甘油，pH7.9@25℃ |
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活性单位定义（Unit Definition） |
在 37℃、pH8.0 的条件下，1 h内使 1 nmol 的 [3H] GMP 掺入酸不溶性沉淀物所需要的酶量定义为1个活性单位。 |
注：具体产品质检数据及更多指标请查看批次质检报告
产品组分
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编号 |
组分 |
产品编号/规格 |
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10613ES92 (10 KU) |
10613ES97 (50 KU) |
10613ES98 (500 KU) |
10613ES99 (5000 KU) |
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10613-A |
T7 RNA polymerase (1 KU/μL) |
10 μL |
50 μL |
500 μL |
5 mL |
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10613-B |
10×Transcription Buffer |
100 μL |
500 μL |
1 mL×5 |
10 mL×5 |
注：10×Transcription Buffer中含60 mM MgCl2和100 mM DTT，但不含有NTP，如需请购买本公司NTP set solution 10133。
产品应用
1. 单链 RNA合成（包括mRNA，siRNA，gRNA等各类RNA前体，以及同位素标记或非同位素标记的RNA探针）
2. 以（Cap analog）为引物合成Capped mRNA
运输和保存方法
干冰运输。-20℃保存，有效期一年。
应用实例
1、按下列体系配制反应体系
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组分 |
体积（μL） |
终浓度 |
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10×Transcription Buffer (Mg2+ Plus) |
2 |
1× |
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CTP/GTP/ATP/UTP (100 mM each) |
0.4 each |
2 mM each |
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T7 RNA Polymerase (1 KU/μL) |
0.5-1 |
- |
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RNase inhibitor (40 U/μL) |
1 |
- |
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RNase free H2O |
Up to 18 |
- |
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模板DNA |
2 (100 ng-1μg) |
- |
【注】：
①. DNA模板需要最后加入。由于10×Buffer中含有亚精胺，亚精胺浓度过高会引起DNA模板沉淀。
②. Buffer和水建议放置到室温，然后开始使用，反应于室温下配制，防止温度低引起亚精胺沉淀高浓度DNA模板。
③.若转录长度< 100 nt，模板投入量可增加至2 μg。
④. RNase inhibitor (40 U/μL)请购买本公司产品10603。
⑤.为了特定区域的有效转录，建议在其区域下游把模板DNA预先切成平端或5′突出末端。
2、37℃反应1-2 h（若转录长度≤ 100 nt，增加时间至4-8 h）。
3、反应结束后，使用2 U DNaseⅠ（无RNase）37℃、15 min去除DNA模板。
4、转录产物纯化：体外转录产物可选用RNA Cleaner磁珠进行纯化（12602），以去除蛋白、盐离子和其他杂质。也可以采用酚/氯仿纯化法（具体操作步骤可联系Yeasen索取）。
注意事项
1、DNA模板的种类：推荐使用含T7启动子的线性化质粒和PCR产物作为模板。
2、转录模板的纯度会显著影响体外转录反应。在质粒DNA抽提过程中残留的RNase A会显著影响转录RNA的质量。通过酚-氯仿抽提的质粒DNA为最佳模板；PCR产物建议采用胶回收纯化后使用。
3、在20 μL反应体系中加入0.02 U热稳定无机焦磷酸酶可显著提高转录产量。
4、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
HB211021
