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产品描述
Hieff NGS® Fast-Pace DNA Ligation Module是针对Illumina®高通量测序平台文库构建专业设计的DNA连接模块。本产品可在双链平末端DNA片段或双链3´-dA DNA片段的两端连接Illumina®测序平台适用的DNA接头，具有连接效率高、简便、可实现自动化等优势。本产品已与Hieff NGS® End Repair/dA-Tailing Module（Cat#12608），2×Hieff Canace®Ⅱ High-Fidelity Mix for Library Amplification（Cat#12621）共同用于DNA文库构建，通过Illumina®高通量平台测序验证其有效性。本产品中提供的所有试剂组分，都经过严格的质量与功能验证，最高程度保障产品优异性能与批间稳定性。
产品组分
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产品编号 |
组分名称 |
规格 |
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12607ES24 |
12607ES96 |
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12607-A |
Fast-Pace T4 DNA Ligase |
120 μL |
480 μL |
|
12607-B |
5×Fast-Pace Ligation Buffer |
480 μL |
960×2 μL |
测序验证
本品与Hieff NGS® End Repair/dA-Tailing Module（Cat#12608），2×Hieff Canace®Ⅱ High-Fidelity Mix for Library Amplification（Cat#12621）共同用于DNA文库构建，通过Illumina®高通量平台测序验证其有效性。
运输与保存方法
冰袋运输。-20℃保存，效期一年。
注意事项
1）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
2）本产品仅作科研用途!
使用方法
1. Adapter的质量和使用浓度直接影响连接效率及文库产量。Adapter用量过高可能会产生较多Adapter Dimer；用量较低可能会影响连接效率及文库产量。表1列举了使用本试剂盒，不同Input DNA量推荐的Adapter使用量。
表1.500 pg-1 μg Input DNA推荐的Adapter使用浓度
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Input DNA |
Adapter : Input DNA摩尔比 |
Input DNA |
Adapter : Input DNA摩尔比 |
|
500 ng |
20:1 |
25 ng |
200:1 |
|
250 ng |
40:1 |
10 ng |
200:1 |
|
100 ng |
100:1 |
1 ng |
200:1 |
|
50 ng |
100:1 |
500 pg |
400:1 |
【注】：Input DNA摩尔数（pmol）≈ Input DNA质量(ng)/ [0.66 × Input DNA平均长度（bp）]。
2. 目前主流的合并法DNA建库试剂盒，其末端修复和加A处理后一般不纯化，直接进行接头连接。本试剂盒可与主流的商业化末端修复加A体系兼容，进行接头连接。反应体系请参考如下配制，并涡旋混匀几秒钟，瞬离后至于20℃，反应15分钟即可。
表2.Adapter Ligation体系
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名称 |
体积（μL） |
|
dA-tailed DNA |
60 |
|
5×Fast-Pace Ligation Buffer |
20* |
|
Fast-Pace T4 DNA Ligase |
5 |
|
DNA Adapter |
X** |
|
dd2O |
To 100 |
【注】：*对于Ligation Enhancer，请上下颠倒、振荡，充分混匀并瞬时后离心使用。
**根据自身需求加入适量的接头。
【接头添加计算举例】：当Input DNA为100 ng，Input DNA长度为300 bp时，接头应该添加多少？
第一步，计算Input DNA摩尔数。公式：Input DNA摩尔数（pmol）≈ Input DNA质量(ng)/ [0.66 × Input DNA平均长度（bp）]；
Input DNA 摩尔数（pmol）=100÷（0.66×300）=0.5 pmol；
第二步，计算接头添加摩尔数。根据注意事项三表2查询接头添加比例；
根据表2，查得Input DNA 100ng时接头添加比例100:1，则接头添加摩尔数=100×0.5 pmol=50 pmol；
第三步，计算接头添加体积。接头浓度=15 μmol/L（如使用其他接头，浓度需要依据其他接头浓度参数）；
接头添加体积=接头添加摩尔数（50 pmol）÷接头浓度（15 μmol/L）=3.34 μL（注：15 μmol/L=15 pmol/μL）
综上，接头可添加3.4 μL，加1.6 μL水补齐至5 μL。（注：接头最大加入体积不超过5 μL）
相关产品
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建库试剂盒 |
产品编号 |
规格 |
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Hieff NGS® MaxUp Dual-mode mRNA Library Prep Kit for Illumina® |
12301ES08/24/96 |
8/24/96 T |
|
12200ES24/96 |
24/96T |
|
|
12201ES24/96 |
24/96T |
|
|
12203ES24/96 |
24/96 T |
|
|
12206ES08/24/96 |
8/24/96 T |
|
|
文库构建磁珠 |
产品编号 |
规格 |
|
12599ES08/56 |
5/60 mL |
|
|
12600ES08/56 |
5/60 mL |
|
|
Hieff NGS® DNA Selection Beads（Superior AMPure XP alternative） |
12601ES08/56 |
5/60 mL |
|
12603ES24/96 |
24/96 T |
|
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建库接头 |
产品编号 |
规格 |
|
12615ES04/16 |
12×4/12×16 T |
|
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12616ES04/16 |
12×4/12×16 T |
|
|
12617ES04/16 |
12×4/12×16 T |
|
|
12618ES04/16 |
12×4/12×16 T |
|
|
12610ES96 |
96 T |
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建库模块 |
产品编号 |
规格 |
|
12607ES24/96 |
24/96 T |
|
|
12608ES24/96 |
24/96 T |
|
|
2×Super Canace®Ⅱ High-Fidelity Mix for Library Amplification |
12621ES03/08 |
1/5×1mL |
|
Hieff NGS® Dual-Mode cDNA Synthesis Kit |
12250ES24/96 |
24/96 T |
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文库定量 |
产品编号 |
规格 |
|
Hieff NGS® Library Quantification Kit for Illumina®, qPCR Master Mix |
12302ES05 |
500 T |
|
Hieff NGS® Library Quantification Kit for Illumina®,DNA Standard (1-6) |
12307ES09 |
6×96 μL |
|
12640ES60/76 |
100/500 T |
|
|
多重PCR |
产品编号 |
规格 |
|
Hieff® Multiplex PCR Kit |
12279ES50/76 |
100/500 T |
|
Hieff® Multiplex PCR Master Mix |
12280ES50/76 |
50 /200 T |
HB210810
