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类器官构建指南丨子宫内膜癌类器官篇
类器官构建指南丨子宫内膜癌类器官篇
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2026-10-29
子宫内膜癌是起源于子宫内膜上皮组织的恶性肿瘤，是女性生殖系统常见的恶性肿瘤之一。据国家癌症中心数据，2022年我国子宫内膜癌新发病例约7.77万例，死亡病例约1.35万例。近年来发病率持续上升，部分经济发达城市发病率已超过子宫颈癌，成为发病率最高的妇科恶性肿瘤。子宫内膜癌预后整体良好，早期患者5年生存率可达90%以上，但转移性/复发性子宫内膜癌的治疗选择有限，预后较差。
图1. 全球子宫内膜癌发病率与死亡率
传统2D培养和动物模型难以准确反映患者个体化的肿瘤异质性和药物反应。类器官是一种多细胞三维组织结构，能够更准确有效地表达肿瘤异质性，兼顾肿瘤细胞和细胞外基质之间的相互作用，已成为稳定可靠的临床前研究模型。
采用优化培养方案后，子宫内膜癌类器官的构建成功率可达71%~91%。类器官模型能够高度还原原发肿瘤的组织学特征、分子标志物及基因突变谱，为药物敏感性检测和个体化治疗提供了可靠的体外平台。
图2. 不同类器官模型构建
子宫内膜癌类器官的构建主要包括样本采集与处理、组织解离与细胞分离、三维培养与类器官形成、传代与冻存四个环节。
1. 组织离体后迅速转移至预冷组织保存液中，2-8℃低温转运至实验室，确保细胞活性。
2. Ceturegel®基质胶（40192ES）置于4℃冰箱过夜或冰上缓慢解冻；Cebrary®子宫内膜癌类器官培养基（41441ES）提前取出恢复至室温备用。
3. 在生物安全柜中，将组织转移至含20mL预冷DPBS的离心管中，浸泡10分钟，弃上清，重复2-3次。
4. 将组织转移至无菌培养皿，去除表面杂质、坏死组织及脂肪，用无菌剪刀或手术刀剪碎至直径约0.5-1mm³碎块。子宫内膜癌组织富含间质成分，建议尽可能去除纤维化区域。
5. 将剪碎组织转移至新的50mL离心管，加入20mL预冷DPBS清洗1分钟，弃上清，重复2-3次。
6. 加入10mL预热的组织消化液（41423ES），37℃摇床或培养箱中消化30-60分钟。期间每10分钟镜检观察，待组织块明显分散、悬液变浑浊时终止消化。
7. 加入20mL DPBS（约2倍体积）终止消化，用移液器反复吹打至无明显大块残留。
8. 100μm细胞筛网过滤去除未消化组织，收集滤液。向原消化管中加DPBS再次吹打并过滤，合并滤液，定容至40mL。
9. 在4℃，300×g条件下离心5分钟，弃上清。
10. 红细胞裂解（可选）：若沉淀中红细胞较多，加入2-5mL红细胞裂解液，室温静置1-2分钟，加DPBS终止裂解，再次离心。
11. 用5mL DPBS重悬沉淀，离心洗涤1次，去除残留酶及裂解液。加入1mL DPBS重悬，计数并评估活率。
12. 根据计数结果，使用DPBS将细胞悬液体积调整至5mL，再次离心获得浓缩细胞沉淀。
13. 用预冷枪头，将预冷Ceturegel®基质胶与细胞沉淀按1:1体积比轻柔混匀（基质胶终浓度≥70%），调整至每μL基质胶含100-1000个细胞。全程冰上操作，避免气泡。
14. 立即用预冷枪头吸取50μL细胞-基质胶混合液，滴加于24孔板孔底中央，确保液滴圆整、不与孔壁接触。
15. 将培养板转移至37℃、5% CO₂培养箱，静置孵育15-30分钟至基质胶完全凝固。沿孔壁缓慢加入500μL预热的Cebrary®子宫内膜癌类器官完全培养基，避免冲散胶滴。
16. 置于37℃培养箱中继续培养，每2-3天换液，每日镜检观察类器官形成、形态与生长状态。子宫内膜癌类器官一般7-14天可见类器官形成。
图3. 子宫内膜癌类器官培养情况
传代：当类器官生长密集、培养基变黄或胶滴出现中心坏死时进行传代。吸去培养基，用PBS洗涤，加入消化液37℃消化5-15分钟，轻柔吹打后加入终止液，300×g离心5分钟，按1:2~1:4比例重新包埋于新鲜基质胶中。
冻存：将消化后的类器官悬液离心，弃上清后加入适量类器官冻存液（41422ES）重悬，调整密度至200–500个/mL，分装至冻存管（1mL/管）。将冻存管置于程序降温盒中，以-1℃/min速率降温至-80℃，24h后转移至液氮中长期保存。
复苏：从液氮中取出冻存管，立即放入37℃水浴快速晃动1–2min至大部分融化。将悬液转移至含5mL预温培养基的离心管中，轻轻混匀，离心后弃上清，再用5mL培养基重悬洗涤一次。最后以适量培养基重悬，与基质胶混合后接种至培养板，置于37℃、5% CO₂培养箱中培养。
注： 操作全程需于生物安全柜或超净工作台内进行。所有与组织及细胞接触的离心管、吸头、筛网等耗材，使用前均需使用专用润洗液进行润洗，以最大限度减少细胞损失与粘附。
[1] How, J.A., Jazaeri, A.A., Westin, S.N. et al. Translating biological insights into improved management of endometrial cancer. Nat Rev Clin Oncol 21, 781–800 (2024). https://doi.org/10.1038/s41571-024-00934-7
[2] Li, J., Zhou, M., Xie, J. et al. Organoid modeling meets cancers of female reproductive tract. Cell Death Discov. 10, 410 (2024). https://doi.org/10.1038/s41420-024-02186-x
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货号 |
产品名称 |
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Cebrary® Endometrial Cancer Organoid Growth Medium (Human) 子宫内膜癌类器官生长培养基 |
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Ceturegel® Matrix for Organoid culture，Phenol Red-Free，LDEV-Free Plus 基质胶 |
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Cebrary® Cell recovery solution for Organoid 类器官回收液 |
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Cebrary® Cell freezing medium for Organoid 类器官冻存液 |
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Cebrary®Tissue Digestion Solution 组织消化液 |
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Cebrary® Tissue Storage Solution 组织保存液 |
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Cebrary® Organoid Rinsing Solution 类器官专用润洗液 |
