细胞培养过程中碰到小黑点，到底是什么呢？(附建议)

让我们先来看看细胞遭受小黑点入侵后的灾难现场。

小黑点之所以这么令人头痛，是由于它的数量会随着培养时间的增加而不断增加，当数量多到一定程度的时候，就会对细胞的生长造成一定的影响，严重影响科研的进展。在显微镜下观察时往往表现为没有光泽，体积较小的黑色颗粒。

小编这边结合自己多年细胞培养的经历和接触到的客户案例，跟大家分享下培养细胞过程中碰到过的小黑点。

细胞碎片

化学或者物理的强烈刺激（例如胰酶消化时间过长，吹打细胞太过用力等）往往会导致细胞死亡，产生很多的细胞碎片。在显微镜下进行观察时，可以看到很多呈不规则形态、没有光泽的颗粒粘附在细胞培养皿的底部。

状态不好的细胞往往贴壁能力较强，因此切勿用移液器进行强力的吹打，从而损害了健康的细胞；另外，控制好胰酶消化的时间，只需保证大部分正常的细胞被消化下来就可以了，然后更换新的细胞培养皿。

凋亡小体

体外培养的动物细胞很容易受到培养环境因素的影响，例如营养成分的改变、氧的供给、毒素、细胞代谢产物的积累、pH、剪切力、细胞密度及微生物污染等。这些环境的改变都有可能诱发细胞的凋亡，从而产生很多分泌的凋亡小体。凋亡小体大多游离在培养基中，但也有一些会通过暴露的核酸彼此之间相互黏连，从而形成一个棕色的凋亡小体团块，没有细胞光泽。

建议：

细胞培养的过程中一定要控制细胞传代的时间，不能让细胞"长过"；不要使用过酸或者过碱的培养基进行细胞培养；选用内毒素含量较低的血清。

血清中的沉淀

磷酸钙是常见的一种沉淀物，通常会使血清出现浑浊，并且在37℃培养的时候会增加。这种沉淀物在倒置显微镜下观察像小黑点，这些小黑点由于布朗运动看上去可以活动，因此经常被误认为是微生物污染。

建议：

经过热处理的血清，沉淀物的形成会显著增多，对于大多数的细胞而言是不需要进过高温灭活处理的。

黑胶虫

对于细胞培养过程中的小黑点到底是什么，目前呼声高的非黑胶虫莫属，但是小编查看了很多的资料，依旧不知道其为何方神圣。有人认为是从血清中来的一种原虫，有人认为是细菌，或是真菌，也有人认为是血清中的蛋白结晶，因此消灭黑胶虫的方式也是各式各样。

建议：

如果污染的细胞数量不是很多，建议直接丢弃，或者重新复苏细胞进行培养。

支原体的污染

黑胶虫的污染很难定性，大部分被黑胶虫污染的细胞都存在生长迟缓，培养基颜色没有明显的改变现象，更像是受到了支原体的污染。已有通过使用支原体去除试剂解决黑胶虫污染困扰的成功案例，为此Yeasen公司特别研发了针对支原体污染的一系列产品，包括支原体的检测，支原体的去除，以及去除后防止支原体再度感染的支原体预防试剂。（往下看）

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