Bst Plus DNA Polymerase来源于Bacillus stearothermophilus DNA Polymerase I,经基因工程改造去除了其5’-3’核酸外切酶活性,但保留了5’-3’ DNA聚合酶活性和强链置换活性。与野生型Bst DNA Polymerase相比,该酶在扩增速度、产量、耐盐性和热稳定性等方面均有大幅提高,同时增加了dUTP耐受性,非常适合于等温扩增反应,如LAMP反应。本产品将无甘油Bst Plus DNA Polymerase冻干,解决了无甘油酶不稳定问题,可以用于制作冻干产品。
产品组分
组分编号 |
组分名称 |
产品编号/规格 |
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14405ES60 (12 KU) |
14405ES97 (120 KU) |
14405ES98 (1200 KU) |
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14405-A |
Lyophilized Bst Plus DNA Polymerase (60 U/μL,Glycerol-Free) |
1 瓶(200 μL) |
5 瓶(400 μL) |
10 瓶(2mL) |
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14405-B |
冻干单酶复溶液 |
200 μL |
2mL |
20 mL |
使用方法:
若用于后续冻干,请用沿壁缓慢滴入200 μL(以14405ES60为例)冻干单酶复溶液复溶,得到总体积为200 μL的无甘油Bst 酶,也可以分多次加入冻干单酶复溶液复溶,得到总体积为200 μL的无甘油Bst 酶。复溶后的无甘油Bst 酶可短暂保存于4℃。
产品应用
等温扩增反应。
单位定义
1 U指65℃条件下反应30 min,能使10 nmol的dNTP掺入酸不溶性沉淀物所需的酶量。
热失活
85℃,5 min。
运输与保存方法
避光室温运输。避光-20℃保存,有效期1年。
注意事项
为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
以LAMP(pH指示剂法)为例
1、反应体系配制
组分 |
单次反应体积(μL) |
终浓度 |
2.5×pH Sensitive Reaction Buffer |
10 |
1× |
1M MgSO4 |
0.2 |
|
25 mM d(AUGC)TPa |
1.4 |
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UDGase |
0.005 |
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无甘油逆转录酶 |
0.075 |
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冻干Bst单酶 |
2 |
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无甘油RNase 抑制剂 |
0.2 |
- |
10×Primersb |
2.5 |
1× |
模板 |
10 ng~1 μg |
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ddH2O |
Up to 25 |
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【注】a. 25mmol/L d(A/U/G/C)TP mix推荐使用浓度为1.2-1.4 mmol/L。
b. 10× Primers:16 µmol/L FIP/BIP, 2 µmol/L F3/B3, 4 µmol/L Loop F/B each;引物组的比例也可以进行适当的调整。
2、反应条件
65°C孵育30~60 min,85℃,5 min失活。
若使用UDG体系,可添加UDG消化反应程序,如25℃,10min。
HB230109