产品简介

 

FuniCut® 系列内切酶是通过基因工程重组技术，可在5~15 min内精确完成DNA切割的快速限制性内切酶，适用于快速切割质粒DNA、PCR产物、基因组DNA等。FuniCut® 系列快速内切酶共用一种酶切缓冲液，从而简化了酶切反应体系，另外，有良好的酶活冗余度，可轻松处理底物过量或困难模板的酶切。

 

产品信息

 

货号	15066ES30
规格	30 T
识别位置	5'-CTCTTC(N)₁↓-3' 3'- GAGAAG(N)₄↑-5'
推荐反应条件	1×FuniCut® 缓冲液；37°C孵育
酶活	20 U/μL
失活条件	80℃温育20 min
同裂酶	Eam1104I, Bst6I

 

组分信息

 

组分编号	组分名称	15066ES30
15066-A	FuniCut® EarI	30 μL
15066-B	10×FuniCut® Buffer	1 mL
15066-C	10×FuniCut® Color Buffer*	1 mL

*10×FuniCut® Color Buffer包括红色和黄色示踪染料，可将产物直接用于凝胶电泳。FuniCut® Color Buffer的红色染料与2500 bp双链DNA片段在1%琼脂糖凝胶中迁移速率接近；黄色染料与10 bp双链DNA片段在1%琼脂糖凝胶中迁移速率接近。

 

储存条件

 

-25~-15℃保存，有效期2年。

 

注意事项

 

1. 3 h孵育未表现星号活性，延时酶切可能出现星号活性。

2. 受CpG甲基化影响，剪切可能受阻。

3. 本产品仅作科研用途。

5. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

 

使用方法

 

1. DNA快速酶切流程

1) 按如下建议的加样顺序配制体系反应液（冰上操作）

组分	质粒DNA	PCR产物	基因组DNA
ddH2O	15 μL	16 μL	30 μL
10×FuniCut® Buffer或10×FuniCut® Color Buffer	2 μL	3 μL*	5 μL
底物DNA	2 μL (~1 μg)	10 μL (~0.2 μg)	10 μL (5 μg)
FuniCut® EarI	1 μL	1 μL	5 μL
Total	20 μL	30 μL	50 μL

*本体系指已纯化后的PCR产物。未纯化的PCR产物具备一定的离子强度，10×FuniCut® Buffer加入量可适当减少至2 μL。若下一步进行克隆等实验，酶切前需纯化PCR产物。

2) 轻柔吸打或轻弹管壁以混匀（切勿涡旋），然后瞬时离心以收集挂壁液滴。

3) 37°C孵育15 min（质粒），或15~30 min（PCR产物），或30~60 min（基因组DNA）。

4) 80℃温育20 min即可使酶失活，停止反应(可选)。

5) 如果使用FuniCut® Color Buffer进行酶切反应，得到的产物可直接上样电泳。

2. 双酶切或多酶切

1) 每种内切酶的用量为1 μL，并根据需要适当扩大反应体系。

2) 所有内切酶的体积总和不得超过总反应体系的1/10。

3) 如果选用的几种内切酶的最适反应温度不同，应先以最适温度低的酶开始酶切，再添加最适温度较高的酶，以较高的温度进行孵育。

3. 质粒的扩大反应体系

组分	体积（20 μL）	体积（20 μL）	体积（50 μL）*
DNA	1 μg	2 μg	5 μg
10×FuniCut® Buffer或10×FuniCut® Color Buffer	2 μL	2 μL	5 μL
FuniCut® EarI	1 μL	2 μL	5 μL
Total	20 μL	20 μL	50 μL

*如果总反应体系大于20 μL，可使用水浴、金属浴或沙浴，并增加孵育时间。

4. 不同DNA中的识别位点数

λDNA	ΦX174	pBR322	pUC57	pUC18/19	SV40	M13mp18/19	Adeno2
34	2	2	3	3	1	2	29

5. 甲基化修饰影响

Dam	Dcm	CpG	EcoKI	EcoBI
无影响	无影响	剪切受影响	无影响	无影响

6. 不同反应缓冲液中的活性*

反应缓冲液	FuniCut® Buffer	Thermo Scientific FastDigest Buffer	NEB CutSmart® Buffer	Takara QuickCut™ Buffer
活性	100%	12.5%	100%	25%

*活性数据来自翌圣生物限制酶标准反应体系下的检测。